മൾട്ടിപ്ലക്സ് വൺ സ്റ്റെപ്പ് RT-qPCR Premix-UNG
പൂച്ച നമ്പർ: HCB5145A
മൾട്ടിപ്ലക്സ് വൺ സ്റ്റെപ്പ് RT-qPCR പ്രോബ് കിറ്റ് (UDG പ്ലസ്) എന്നത് ടെംപ്ലേറ്റായി RNA അടിസ്ഥാനമാക്കിയുള്ള ഒരു മൾട്ടിപ്ലക്സ് ക്വാണ്ടിറ്റേറ്റീവ് PCR കിറ്റാണ്.പരീക്ഷണ പ്രക്രിയയിൽ, റിവേഴ്സ് ട്രാൻസ്ക്രിപ്ഷനും ക്വാണ്ടിറ്റേറ്റീവ് പിസിആറും ഒരേ ട്യൂബിൽ നടത്തി, ഇത് പരീക്ഷണാത്മക പ്രവർത്തനം ലളിതമാക്കുകയും മലിനീകരണ സാധ്യത കുറയ്ക്കുകയും ചെയ്തു.ഈ കിറ്റിൽ, ആദ്യത്തെ സ്ട്രാൻഡ് സിഡിഎൻഎ ഹീറ്റ്-റെസിസ്റ്റൻ്റ് റിവേഴ്സ് ട്രാൻസ്ക്രിപ്റ്റേസ് ഉപയോഗിച്ച് കാര്യക്ഷമമായി സമന്വയിപ്പിക്കുകയും ഹോട്ട്സ്റ്റാർട്ട് ടാഗ് ഡിഎൻഎ പോളിമറേസ് ഉപയോഗിച്ച് അളവ് വർദ്ധിപ്പിക്കുകയും ചെയ്തു.കിറ്റിൽ പ്രധാനമായും ഒപ്റ്റിമൈസ് ചെയ്ത MP ബഫർ, എൻസൈമുകളുടെ മിശ്രിതം മുതലായവ അടങ്ങിയിരിക്കുന്നു. ബഫർ ലായനിയിൽ ഇതിനകം Mg അടങ്ങിയിരിക്കുന്നു2+കൂടാതെ dNTP.കൂടാതെ, നോൺ-സ്പെസിഫിക് പിസിആർ ആംപ്ലിഫിക്കേഷനെ ഫലപ്രദമായി തടയാനും ഒന്നിലധികം qPCR പ്രതികരണങ്ങളുടെ ആംപ്ലിഫിക്കേഷൻ കാര്യക്ഷമത മെച്ചപ്പെടുത്താനും കഴിയുന്ന ഘടകങ്ങൾ ചേർക്കുന്നു, ഇത് ആംപ്ലിഫിക്കേഷൻ കാര്യക്ഷമത ഉറപ്പാക്കാനും ഒന്നിലധികം ആംപ്ലിഫിക്കേഷൻ പ്രതികരണം വരെ നടത്താനും കഴിയും.എയറോസോൾ മലിനീകരണത്തിൻ്റെ അപകടസാധ്യത ഫലപ്രദമായി തടയാൻ dUTP/UDG സിസ്റ്റം ചേർത്തു.
ഘടകങ്ങൾ
1. ബഫർ
2. എൻസൈം മിക്സ്
സ്പെസിഫിക്കേഷൻ
| ചൂടുള്ള തുടക്കം | ബിൽറ്റ്-ഇൻ ഹോട്ട് സ്റ്റാർട്ട് |
| കണ്ടെത്തൽ രീതി | പ്രൈമർ-പ്രോബ് കണ്ടെത്തൽ |
| PCR രീതി | ഒരു ഘട്ടം RT-qPCR |
| പോളിമറേസ് | ടാക്ക് ഡിഎൻഎ പോളിമറേസ് |
| സാമ്പിൾ തരം | ഡിഎൻഎ |
സംഭരണ വ്യവസ്ഥകൾ
ഡ്രൈ ഐസ് ഉപയോഗിച്ചാണ് ഉൽപ്പന്നം കയറ്റി അയക്കുന്നത്, 1 വർഷത്തേക്ക് -25~-15℃ വരെ സൂക്ഷിക്കാം.ഇത് ഇടയ്ക്കിടെ ഒഴിവാക്കണംഫ്രീസ്-ഥോ.വെവ്വേറെ സംരക്ഷിക്കാൻ ശുപാർശ ചെയ്യുന്നു.
നിർദ്ദേശങ്ങൾ
1.പ്രതികരണം സിസ്റ്റം
| ഘടകങ്ങൾ | വോളിയം (μL) | അന്തിമ ഏകാഗ്രത |
| 2 × MP ബഫർ | 12.5 | 1× |
| എൻസൈം മിക്സ് | 1 | - |
| പ്രൈമർ/പ്രോബ് മിക്സ് (2.5 μM) | 3 | 0.3μM |
| ടെംപ്ലേറ്റ് RNA | 1-10 | - |
| RNase സൗജന്യ H2O | 25 വരെ | - |
കുറിപ്പുകൾ:
ഉപയോഗിക്കുന്നതിന് മുമ്പ് നന്നായി മിക്സ് ചെയ്യുന്നത് ഉറപ്പാക്കുക, അക്രമാസക്തമായ വൈബ്രേഷൻ മൂലമുണ്ടാകുന്ന അമിതമായ കുമിളകൾ ഒഴിവാക്കുക.
എ.പ്രൈമർ കോൺസൺട്രേഷൻ: മൾട്ടിപ്ലക്സ് പ്രൈമർ ഉൾപ്പെടെയുള്ള പ്രൈമർ മിക്സ്, സാഹചര്യത്തെ ആശ്രയിച്ച് ഒപ്റ്റിമൽ പ്രൈമർ കോൺസൺട്രേഷൻ 0.l നും 1.0μM നും ഇടയിലായിരിക്കാം.
ബി.പ്രോബ് കോൺസൺട്രേഷൻ: മൾട്ടിപ്ലക്സ് പ്രോബ് ലേബലിംഗ് വ്യത്യാസം ഫ്ലൂറസെൻ്റ് ഗ്രൂപ്പ് ഉൾപ്പെടെയുള്ള പ്രോബ് മിക്സ്, സാഹചര്യത്തെ ആശ്രയിച്ച് ഒപ്റ്റിമൽ പ്രോബ് കോൺസൺട്രേഷൻ 0.05 നും 0.5μM നും ഇടയിലായിരിക്കാം.
സി.ടെംപ്ലേറ്റ് ഡൈല്യൂഷൻ: qPCR വളരെ സെൻസിറ്റീവ് ആയതിനാൽ ടെംപ്ലേറ്റ് നേർപ്പിക്കാൻ ശുപാർശ ചെയ്യുന്നു.നിയന്ത്രണ Ct മൂല്യം 20 നും 35 നും ഇടയിൽ അനുയോജ്യമാണ്.
ഡി.സിസ്റ്റം തയ്യാറാക്കൽ: അൾട്രാ ക്ലീൻ വർക്കിംഗ് ടേബിളിലും ന്യൂക്ലീസ് അവശിഷ്ടങ്ങളില്ലാതെ പൈപ്പറ്ററും റിയാക്ഷൻ ട്യൂബും ദയവായി തയ്യാറാക്കുക;ഫിൽട്ടർ ഘടകം ഉപയോഗിച്ച് തോക്ക് തല ഉപയോഗിക്കാൻ ശുപാർശ ചെയ്യുന്നു.ക്രോസ് മലിനീകരണവും എയറോസോൾ മലിനീകരണവും ഒഴിവാക്കുക.
2. ഒപ്റ്റിമൈസ് ചെയ്ത സൈക്ലിംഗ്പ്രോട്ടോക്കോൾ
| സൈക്കിൾ ഘട്ടം | താൽക്കാലികം. | സമയം | സൈക്കിളുകൾ |
| റിവേഴ്സ് ട്രാൻസ്ക്രിപ്ഷൻ | 50℃എ | 20 മിനിറ്റ് | 1 |
| പ്രാരംഭ-ഡീനാറ്ററേഷൻ | 95℃ | 5 മിനിറ്റ് | 1 |
| ആംപ്ലിഫിക്കേഷൻ പ്രതികരണം | 95℃ | 15 സെക്കൻഡ് |
40-45 |
| 60℃ b | 30 സെക്കൻഡ് c |
കുറിപ്പുകൾ:
എ.റിവേഴ്സ് ട്രാൻസ്ക്രിപ്ഷൻ: താപനില 42°C അല്ലെങ്കിൽ 50°C തിരഞ്ഞെടുക്കാം.
ബി.ആംപ്ലിഫിക്കേഷൻ പ്രതികരണം: രൂപകൽപ്പന ചെയ്ത പ്രൈമറുകളുടെ Tm മൂല്യം അനുസരിച്ച് താപനില ക്രമീകരിക്കപ്പെടുന്നു.
സി.ഫ്ലൂറസെൻസ് സിഗ്നൽ ഏറ്റെടുക്കൽ: ഇൻസ്ട്രുമെൻ്റ് മാനുവലിൻ്റെ ആവശ്യകതകൾക്കനുസരിച്ച് പരീക്ഷണാത്മക നടപടിക്രമം സജ്ജമാക്കുക.
കുറിപ്പുകൾ
നിങ്ങളുടെ ആരോഗ്യവും സുരക്ഷയും ഉറപ്പാക്കാൻ, ലാബ് കോട്ടും കയ്യുറകളും പോലുള്ള ആവശ്യമായ PPE ധരിക്കുക.
