മൗസ് ജെനോടൈപ്പിംഗ് കിറ്റ്

പൂച്ച നമ്പർ: HCR2021A

ഡിഎൻഎ ക്രൂഡ് എക്‌സ്‌ട്രാക്‌ഷൻ, പിസിആർ ആംപ്ലിഫിക്കേഷൻ സിസ്റ്റം എന്നിവയുൾപ്പെടെ മൗസിൻ്റെ ജനിതകരൂപങ്ങളുടെ ദ്രുതഗതിയിലുള്ള തിരിച്ചറിയലിനായി രൂപകൽപ്പന ചെയ്‌തിരിക്കുന്ന ഒരു കിറ്റാണ് ഈ ഉൽപ്പന്നം.Lysis Buffer, Proteinase k എന്നിവ ഉപയോഗിച്ച് ലളിതമായ പിളർപ്പിന് ശേഷം മൗസ് ടെയിൽ, ചെവി, കാൽവിരലുകൾ, മറ്റ് ടിഷ്യുകൾ എന്നിവയിൽ നിന്ന് നേരിട്ട് PCR ആംപ്ലിഫിക്കേഷനായി ഉൽപ്പന്നം ഉപയോഗിക്കാം.ഒറ്റരാത്രികൊണ്ട് ദഹനം, ഫിനോൾ-ക്ലോറോഫോം വേർതിരിച്ചെടുക്കൽ അല്ലെങ്കിൽ കോളം ശുദ്ധീകരണം എന്നിവയില്ല, ഇത് ലളിതവും പരീക്ഷണങ്ങളുടെ സമയം കുറയ്ക്കുന്നതുമാണ്.2kb വരെ ടാർഗെറ്റ് ശകലങ്ങൾ വർദ്ധിപ്പിക്കുന്നതിനും 3 ജോഡി പ്രൈമറുകൾ ഉള്ള മൾട്ടിപ്ലക്സ് PCR പ്രതികരണങ്ങൾക്കും ഉൽപ്പന്നം അനുയോജ്യമാണ്.2×മൗസ് ടിഷ്യൂ ഡയറക്ട് പിസിആർ മിക്‌സിൽ ജനിതകപരമായി രൂപകൽപ്പന ചെയ്ത ഡിഎൻഎ പോളിമറേസ്, എംജി അടങ്ങിയിരിക്കുന്നു.²⁺, dNTP-കളും ഉയർന്ന ആംപ്ലിഫിക്കേഷൻ കാര്യക്ഷമതയും ഇൻഹിബിറ്റർ ടോളറൻസും നൽകുന്നതിനുള്ള ഒപ്റ്റിമൈസ് ചെയ്ത ബഫർ സിസ്റ്റവും, അതുവഴി ടെംപ്ലേറ്റും പ്രൈമറുകളും ചേർത്ത് ഉൽപ്പന്നത്തെ 1× ആയി റീഹൈഡ്രേറ്റ് ചെയ്തുകൊണ്ട് PCR പ്രതികരണങ്ങൾ നടത്താം.ഈ ഉൽപ്പന്നം ഉപയോഗിച്ച് വർദ്ധിപ്പിച്ച PCR ഉൽപ്പന്നത്തിന് 3′ അറ്റത്ത് ഒരു പ്രമുഖ "A" ബേസ് ഉണ്ട്, ശുദ്ധീകരണത്തിന് ശേഷം TA ക്ലോണിംഗിനായി നേരിട്ട് ഉപയോഗിക്കാം.

ഘടകങ്ങൾ

സംഭരണ ​​വ്യവസ്ഥകൾ

ഉൽപ്പന്നങ്ങൾ -25~-15℃ 2 വർഷത്തേക്ക് സൂക്ഷിക്കണം.ഉരുകിയ ശേഷം, ഹ്രസ്വകാല ഒന്നിലധികം ഉപയോഗത്തിനായി ലിസിസ് ബഫർ 2~8℃-ൽ സൂക്ഷിക്കാം, ഉപയോഗിക്കുമ്പോൾ നന്നായി ഇളക്കുക.

അപേക്ഷ

ഈ ഉൽപ്പന്നം മൗസ് നോക്കൗട്ട് വിശകലനം, ട്രാൻസ്ജെനിക് കണ്ടെത്തൽ, ജനിതകമാറ്റം തുടങ്ങിയവയ്ക്ക് അനുയോജ്യമാണ്.

ഫീച്ചറുകൾ

1.ലളിതമായ പ്രവർത്തനം: ജീനോമിക് ഡിഎൻഎ വേർതിരിച്ചെടുക്കേണ്ട ആവശ്യമില്ല;

2.വൈഡ് ആപ്ലിക്കേഷൻ: വിവിധ മൗസ് ടിഷ്യൂകളുടെ നേരിട്ടുള്ള വർദ്ധനവിന് അനുയോജ്യമാണ്.

നിർദ്ദേശങ്ങൾ

1.ജീനോമിക് ഡിഎൻഎയുടെ പ്രകാശനം

1) ലൈസേറ്റ് തയ്യാറാക്കൽ

ലൈസ് ചെയ്യേണ്ട മൌസ് സാമ്പിളുകളുടെ എണ്ണം അനുസരിച്ചാണ് ടിഷ്യു ലൈസേറ്റ് തയ്യാറാക്കുന്നത് (ഡോസ് അനുസരിച്ച് ടിഷ്യു ലൈസേറ്റ് ഓൺ-സൈറ്റിൽ തയ്യാറാക്കുകയും ഉപയോഗത്തിനായി നന്നായി കലർത്തുകയും വേണം), ഒരു സാമ്പിളിന് ആവശ്യമായ റിയാക്ടറുകളുടെ അനുപാതം ഇപ്രകാരമാണ്:

2) സാമ്പിൾ തയ്യാറാക്കലും ലിസിസും

ശുപാർശ ചെയ്യുന്ന ടിഷ്യു ഉപയോഗം

വൃത്തിയുള്ള സെൻട്രിഫ്യൂജ് ട്യൂബുകളിൽ ഉചിതമായ അളവിൽ മൗസ് ടിഷ്യു സാമ്പിളുകൾ എടുക്കുക, ഓരോ സെൻട്രിഫ്യൂജ് ട്യൂബിലും 200μL ഫ്രഷ് ടിഷ്യൂ ലൈസേറ്റ് ചേർക്കുക, ചുഴലിക്കാറ്റ് കുലുക്കുക, തുടർന്ന് 55 ഡിഗ്രിയിൽ 30 മിനിറ്റ് ഇൻകുബേറ്റ് ചെയ്യുക, തുടർന്ന് 98 ഡിഗ്രിയിൽ 3 മിനിറ്റ് ചൂടാക്കുക.

3) സെൻട്രിഫ്യൂഗേഷൻ

ലൈസേറ്റ് നന്നായി കുലുക്കി 12,000 ആർപിഎമ്മിൽ 5 മിനിറ്റ് സെൻട്രിഫ്യൂജ് ചെയ്യുക.പിസിആർ ആംപ്ലിഫിക്കേഷനുള്ള ടെംപ്ലേറ്റായി സൂപ്പർനാറ്റൻ്റ് ഉപയോഗിക്കാം.സംഭരണത്തിനായി ടെംപ്ലേറ്റ് ആവശ്യമാണെങ്കിൽ, സൂപ്പർനാറ്റൻ്റ് മറ്റൊരു അണുവിമുക്തമായ സെൻട്രിഫ്യൂജ് ട്യൂബിലേക്ക് മാറ്റി -20℃-ൽ 2 ആഴ്ചത്തേക്ക് സൂക്ഷിക്കുക.

2.പിസിആർ ആംപ്ലിഫിക്കേഷൻ

-20℃-ൽ നിന്ന് 2×മൗസ് ടിഷ്യൂ ഡയറക്റ്റ് പിസിആർ മിക്സ് നീക്കം ചെയ്ത് ഐസിൽ ഉരുകുക, തലകീഴായി ഇളക്കുക, താഴെപ്പറയുന്ന പട്ടിക പ്രകാരം PCR പ്രതികരണ സംവിധാനം തയ്യാറാക്കുക (ഐസിൽ പ്രവർത്തിക്കുക):

കുറിപ്പ്:

a) ചേർത്ത തുക സിസ്റ്റത്തിൻ്റെ 1/10 കവിയാൻ പാടില്ല, കൂടുതൽ ചേർത്താൽ, PCR ആംപ്ലിഫിക്കേഷൻ തടസ്സപ്പെട്ടേക്കാം.

ശുപാർശ ചെയ്യുന്ന PCR വ്യവസ്ഥകൾ

കുറിപ്പ്:

എ) അനീലിംഗ് താപനില: പ്രൈമറിൻ്റെ Tm മൂല്യത്തെ പരാമർശിച്ച്, അനീലിംഗ് താപനില പ്രൈമറിൻ്റെ ചെറിയ Tm മൂല്യത്തിലേക്ക് സജ്ജീകരിക്കാൻ ശുപാർശ ചെയ്യുന്നു +3~5℃.

പൊതുവായ പ്രശ്നങ്ങളും പരിഹാരങ്ങളും

1.ടാർഗെറ്റുചെയ്‌ത സ്ട്രിപ്പുകളൊന്നുമില്ല

1) അമിതമായ ലിസിസ് ഉൽപ്പന്നം.ഏറ്റവും അനുയോജ്യമായ ടെംപ്ലേറ്റ് തിരഞ്ഞെടുക്കുക, സാധാരണയായി സിസ്റ്റത്തിൻ്റെ 1/10-ൽ കൂടരുത്;

2) സാമ്പിൾ വലുപ്പം വളരെ വലുതാണ്.ലൈസേറ്റ് 10 തവണ നേർപ്പിക്കുക, തുടർന്ന് ആംപ്ലിഫൈ ചെയ്യുക, അല്ലെങ്കിൽ സാമ്പിൾ വലുപ്പം കുറയ്ക്കുകയും വീണ്ടും ലിസിസ് ചെയ്യുകയും ചെയ്യുക;

3) ടിഷ്യു സാമ്പിളുകൾ പുതിയതല്ല.പുതിയ ടിഷ്യു സാമ്പിളുകൾ ഉപയോഗിക്കാൻ ശുപാർശ ചെയ്യുന്നു;

4) മോശം പ്രൈമർ ഗുണനിലവാരം.പ്രൈമർ ഗുണനിലവാരം പരിശോധിക്കുന്നതിനും പ്രൈമർ ഡിസൈൻ ഒപ്റ്റിമൈസ് ചെയ്യുന്നതിനും ആംപ്ലിഫിക്കേഷനായി ജീനോമിക് ഡിഎൻഎ ഉപയോഗിക്കുക.

2.നോൺ-സ്പെസിഫിക് ആംപ്ലിഫിക്കേഷൻ

1) അനീലിംഗ് താപനില വളരെ കുറവാണ്, സൈക്കിൾ നമ്പർ വളരെ കൂടുതലാണ്.അനീലിംഗ് താപനില വർദ്ധിപ്പിക്കുകയും സൈക്കിളുകളുടെ എണ്ണം കുറയ്ക്കുകയും ചെയ്യുക;

2) ടെംപ്ലേറ്റ് കോൺസൺട്രേഷൻ വളരെ കൂടുതലാണ്.ടെംപ്ലേറ്റിൻ്റെ അളവ് കുറയ്ക്കുക അല്ലെങ്കിൽ ആംപ്ലിഫിക്കേഷന് ശേഷം ടെംപ്ലേറ്റ് 10 തവണ നേർപ്പിക്കുക;

3) മോശം പ്രൈമർ പ്രത്യേകത.പ്രൈമർ ഡിസൈൻ ഒപ്റ്റിമൈസ് ചെയ്യുക.

കുറിപ്പുകൾ

1.സാമ്പിളുകൾക്കിടയിൽ മലിനീകരണം ഉണ്ടാകാതിരിക്കാൻ, ഒന്നിലധികം സാംപ്ലിംഗ് ടൂളുകൾ തയ്യാറാക്കണം, ആവർത്തിച്ചുള്ള ഉപയോഗം ആവശ്യമെങ്കിൽ ഉപകരണങ്ങളുടെ ഉപരിതലം 2% സോഡിയം ഹൈപ്പോക്ലോറൈറ്റ് ലായനി അല്ലെങ്കിൽ ന്യൂക്ലിക് ആസിഡ് ക്ലീനർ ഉപയോഗിച്ച് വൃത്തിയാക്കാം.

2.പുതിയ മൗസ് ടിഷ്യൂകൾ ഉപയോഗിക്കാൻ ശുപാർശ ചെയ്യുന്നു, ആംപ്ലിഫിക്കേഷൻ ഫലങ്ങളെ ബാധിക്കാതിരിക്കാൻ സാമ്പിൾ വോളിയം വളരെ വലുതായിരിക്കരുത്.

3.ലൈസിസ് ബഫർ ഫ്രീസ്-ഥോവ് ഒഴിവാക്കണം, ഹ്രസ്വകാല ഒന്നിലധികം ഉപയോഗത്തിനായി 2~8℃-ൽ സൂക്ഷിക്കാം.കുറഞ്ഞ താപനിലയിൽ സംഭരിച്ചാൽ, മഴ ഉണ്ടാകാം, ഉപയോഗിക്കുന്നതിന് മുമ്പ് പൂർണ്ണമായും അലിഞ്ഞുപോകണം.

4.PCR മിക്സ് ഇടയ്ക്കിടെ ഫ്രീസ്-ഥോ ഒഴിവാക്കണം, ഹ്രസ്വകാല ആവർത്തിച്ചുള്ള ഉപയോഗത്തിനായി 4 ഡിഗ്രിയിൽ സൂക്ഷിക്കാം.

5.ഈ ഉൽപ്പന്നം ശാസ്ത്രീയ പരീക്ഷണ ഗവേഷണത്തിന് മാത്രമുള്ളതാണ്, ഇത് ക്ലിനിക്കൽ രോഗനിർണയത്തിനോ ചികിത്സയിലോ ഉപയോഗിക്കാൻ പാടില്ല.