റോബസ്റ്റാർട്ട് ടാക്ക് ഡിഎൻഎ പോളിമറേസ്

റോബസ്റ്റാർട്ട് ടാക്ക് ഡിഎൻഎ പോളിമറേസ് ഒരു ഹോട്ട് സ്റ്റാർട്ട് ഡിഎൻഎ പോളിമറേസ് ആണ്.പിസിആർ സിസ്റ്റം തയ്യാറാക്കലും ആംപ്ലിഫിക്കേഷനും ചെയ്യുന്ന പ്രക്രിയയിൽ പ്രൈമറുകളുടെ നോൺ-സ്പെസിഫിക് അനീലിംഗ് അല്ലെങ്കിൽ പ്രൈമർ അഗ്രഗേഷൻ മൂലമുണ്ടാകുന്ന നിർദ്ദിഷ്ടമല്ലാത്ത പ്രതികരണത്തെ മികച്ച രീതിയിൽ തടയാൻ മാത്രമല്ല ഈ ഉൽപ്പന്നത്തിന് കഴിയൂ.അതിനാൽ, ഇതിന് മികച്ച പ്രത്യേകതയുണ്ട്, കുറഞ്ഞ സാന്ദ്രതയുള്ള ടെംപ്ലേറ്റുകളുടെ ആംപ്ലിഫിക്കേഷനായി ഇത് കൂടുതൽ ഫലപ്രദമാണ്, കൂടാതെ മൾട്ടിപ്ലക്സ്ഡ് പിസിആർ ആംപ്ലിഫിക്കേഷൻ പ്രതികരണത്തിന് ഇത് അനുയോജ്യമാണ്.മാത്രമല്ല, ഈ ഉൽപ്പന്നത്തിന് വളരെ നല്ല പ്രയോഗക്ഷമതയുണ്ട്, കൂടാതെ വ്യത്യസ്ത തരത്തിലുള്ള പിസിആർ പ്രതികരണങ്ങളിൽ സ്ഥിരതയുള്ള ആംപ്ലിഫിക്കേഷൻ ഫലങ്ങൾ ലഭിക്കും.

ഘടകങ്ങൾ

1.5 U/μL റോബസ്റ്റാർട്ട് ടാക്ക് ഡിഎൻഎ പോളിമറേസ്

2.10 × PCR ബഫർ II (Mg²+ സൗജന്യം) (ഓപ്ഷണൽ)

3.25 എംഎം എംജിസിഎൽ₂(ഓപ്ഷണൽ)

* 10 × PCR ബഫർ II (Mg²+ സൗജന്യം) dNTP, Mg²+ എന്നിവ അടങ്ങിയിട്ടില്ല, ദയവായി dNTP-കളും MgCl-യും ചേർക്കുക₂പ്രതികരണ സംവിധാനം തയ്യാറാക്കുമ്പോൾ.

ശുപാർശ ചെയ്യുന്ന ആപ്ലിക്കേഷനുകൾ

1.ഫാസ്റ്റ് ആംപ്ലിഫിക്കേഷൻ.

2.ഒന്നിലധികം ആംപ്ലിഫിക്കേഷൻ.

3.രക്തം, സ്രവങ്ങൾ, മറ്റ് സാമ്പിളുകൾ എന്നിവയുടെ നേരിട്ടുള്ള വർദ്ധനവ്.

4.ശ്വാസകോശ രോഗങ്ങൾ കണ്ടെത്തൽ.

സ്റ്റോറേജ് അവസ്ഥ

ദീർഘകാല സംഭരണത്തിനായി -20 ഡിഗ്രി സെൽഷ്യസ്, ഉപയോഗിക്കുന്നതിന് മുമ്പ് നന്നായി മിക്സ് ചെയ്യണം, ഇടയ്ക്കിടെ ഫ്രീസ്-ഥോവ് ഒഴിവാക്കുക.

*ശീതീകരണത്തിനു ശേഷം മഴ പെയ്യുകയാണെങ്കിൽ, അത് സാധാരണമാണ്;കലർത്തി ഉപയോഗിക്കുന്നതിന് മുമ്പ് അത് ഊഷ്മാവിൽ തുല്യമാക്കാൻ ശുപാർശ ചെയ്യുന്നു.

യൂണിറ്റ് നിർവ്വചനം

സജീവമാക്കിയ സാൽമൺ ബീജം ഡിഎൻഎ ടെംപ്ലേറ്റ്/പ്രൈമർ ആയി ഉപയോഗിച്ച് 30 മിനിറ്റ് നേരത്തേക്ക് 74 ഡിഗ്രി സെൽഷ്യസിൽ ആസിഡ്-ലയിക്കാത്ത വസ്തുക്കളിൽ 10 nmol deoxyribonucleotide സംയോജിപ്പിക്കുന്ന എൻസൈമിൻ്റെ അളവാണ് ഒരു സജീവ യൂണിറ്റ് (U) നിർവചിച്ചിരിക്കുന്നത്.

ഗുണനിലവാര നിയന്ത്രണം

1.SDS-PAGE ഇലക്‌ട്രോഫോറെറ്റിക് പ്യൂരിറ്റി 98% ൽ കൂടുതലാണ്.

2.ആംപ്ലിഫിക്കേഷൻ സെൻസിറ്റിവിറ്റി, ബാച്ച്-ടു-ബാച്ച് നിയന്ത്രണം, സ്ഥിരത.

3.എക്സോജനസ് ന്യൂക്ലീസ് പ്രവർത്തനമില്ല, എക്സോജനസ് എൻഡോ ന്യൂക്ലീസ് അല്ലെങ്കിൽ എക്സോന്യൂക്ലീസ് മലിനീകരണമില്ല

നിർദ്ദേശങ്ങൾ

പ്രതികരണ സജ്ജീകരണം

കുറിപ്പുകൾ:

1) എ.ബഫറിൽ dNTP, Mg²+ എന്നിവ അടങ്ങിയിട്ടില്ല, ദയവായി dNTP-കളും MgCl-യും ചേർക്കുക₂പ്രതികരണ സംവിധാനം തയ്യാറാക്കുമ്പോൾ.

2) ബി.qPCR/qRT-PCR ഉപയോഗിക്കുകയാണെങ്കിൽ, പ്രതികരണ സംവിധാനത്തിലേക്ക് ഫ്ലൂറസെൻ്റ് പ്രോബുകൾ ചേർക്കണം.സാധാരണയായി, 0.2 μM ൻ്റെ അന്തിമ പ്രൈമർ കോൺസൺട്രേഷൻ നല്ല ഫലങ്ങൾ നൽകും;പ്രതികരണ പ്രകടനം മോശമാണെങ്കിൽ, പ്രൈമർ കോൺസൺട്രേഷൻ 0.2-1 μM പരിധിയിൽ ക്രമീകരിക്കാം.പ്രോബ് കോൺസൺട്രേഷൻ സാധാരണയായി 0.1-0.3 μM പരിധിയിൽ ഒപ്റ്റിമൈസ് ചെയ്യപ്പെടുന്നു.പ്രൈമറിൻ്റെയും പ്രോബിൻ്റെയും മികച്ച സംയോജനം കണ്ടെത്താൻ കോൺസൺട്രേഷൻ ഗ്രേഡിയൻ്റ് പരീക്ഷണങ്ങൾ നടത്താം.

തെർമൽ സൈക്ലിംഗ് പ്രോട്ടോക്കോൾ

കുറിപ്പുകൾ

1.ഫാസ്റ്റ് ഡിഎൻഎ പോളിമറേസിൻ്റെ ആംപ്ലിഫിക്കേഷൻ നിരക്ക് 1 kb/10 സെക്കൻ്റിൽ കുറവായിരിക്കരുത്.വിവിധ PCR ഉപകരണങ്ങളുടെ താപനില വർദ്ധനയും വീഴ്ചയും, താപനില നിയന്ത്രണ മോഡ്, താപ ചാലക കാര്യക്ഷമത എന്നിവ വളരെ വ്യത്യാസപ്പെട്ടിരിക്കുന്നു, അതിനാൽ നിർദ്ദിഷ്ട ഫാസ്റ്റ് PCR ഉപകരണത്തിന് അനുയോജ്യമായ പ്രതികരണ സാഹചര്യങ്ങൾ ഒപ്റ്റിമൈസ് ചെയ്യാൻ ശുപാർശ ചെയ്യുന്നു.

2.ഉയർന്ന പ്രത്യേകതയും സെൻസിറ്റിവിറ്റിയും ഉള്ള ഈ സിസ്റ്റം വളരെ അഡാപ്റ്റബിൾ ആണ്.

3.ഉയർന്ന സെൻസിറ്റിവിറ്റിയുള്ള PCR ഡിറ്റക്ഷൻ റിയാജൻ്റുകളായി ഉപയോഗിക്കുന്നതിന് അനുയോജ്യം, മൾട്ടിപ്ലെക്‌സ് PCR ആംപ്ലിഫിക്കേഷൻ പ്രതികരണങ്ങളിൽ ഇത് ഉപയോഗിക്കാം.

4.5′→3′ പോളിമറേസ് പ്രവർത്തനം, 5′→3′ എക്സോന്യൂക്ലീസ് പ്രവർത്തനം;3′→5′ എക്സോന്യൂക്ലീസ് പ്രവർത്തനം ഇല്ല;പ്രൂഫ് റീഡിംഗ് ഫംഗ്‌ഷനില്ല.

5.PCR, RT-PCR എന്നിവയുടെ ഗുണപരവും അളവ്പരവുമായ പരിശോധനയ്ക്ക് അനുയോജ്യം.

6.PCR ഉൽപ്പന്നത്തിൻ്റെ 3′ അവസാനം A ആണ്, ഇത് നേരിട്ട് T വെക്റ്ററിലേക്ക് ക്ലോൺ ചെയ്യാവുന്നതാണ്.

7.കുറഞ്ഞ അനീലിംഗ് താപനിലയുള്ള പ്രൈമറുകൾക്കോ ​​200 ബിപിയിൽ കൂടുതൽ നീളമുള്ള ശകലങ്ങളുടെ ആംപ്ലിഫിക്കേഷനോ മൂന്ന്-ഘട്ട രീതി ശുപാർശ ചെയ്യുന്നു.