യൂണിവേഴ്സൽ SYBR ഗ്രീൻ qPCR പ്രീമിക്സ് (നീല)
പൂച്ച നമ്പർ: HCB5041B
യൂണിവേഴ്സൽ ബ്ലൂ qPCR മാസ്റ്റർ മിക്സ് (ഡൈ ബേസ്ഡ്) 2×തത്സമയ ക്വാണ്ടിറ്റേറ്റീവ് PCR ആംപ്ലിഫിക്കേഷനായുള്ള ഒരു പ്രീ-സൊല്യൂഷനാണ്, ഉയർന്ന സെൻസിറ്റിവിറ്റിയും സ്പെസിഫിറ്റിയും സ്വഭാവ സവിശേഷതകളാണ്, നീല നിറമാണ്, കൂടാതെ സാമ്പിൾ കൂട്ടിച്ചേർക്കൽ ട്രെയ്‌സിംഗിൻ്റെ ഫലവുമുണ്ട്.സാമ്പിൾ തയ്യാറാക്കുന്ന സമയത്ത് പ്രൈമർ അനീലിംഗ് കാരണം നോൺ-സ്പെസിഫിക് ആംപ്ലിഫിക്കേഷനെ ഫലപ്രദമായി തടയാൻ പ്രധാന ഘടകമായ Taq DNA പോളിമറേസ് ആൻ്റിബോഡി ഹോട്ട് സ്റ്റാർട്ട് ഉപയോഗിക്കുന്നു.അതേസമയം, പിസിആർ പ്രതിപ്രവർത്തനത്തിൻ്റെ ആംപ്ലിഫിക്കേഷൻ കാര്യക്ഷമത മെച്ചപ്പെടുത്തുന്നതിനും വ്യത്യസ്ത ജിസി ഉള്ളടക്കങ്ങളുള്ള (30 ~ 70%) ജീനുകളുടെ ആംപ്ലിഫിക്കേഷൻ തുല്യമാക്കുന്നതിനും ഫോർമുല പ്രോത്സാഹിപ്പിക്കുന്ന ഘടകങ്ങൾ ചേർക്കുന്നു, അതുവഴി ക്വാണ്ടിറ്റേറ്റീവ് പിസിആറിന് വിശാലമായ അളവിൽ നല്ല രേഖീയ ബന്ധം ലഭിക്കും. പ്രദേശം.ഈ ഉൽപ്പന്നത്തിൽ പ്രത്യേക ROX പാസീവ് റഫറൻസ് ഡൈ അടങ്ങിയിരിക്കുന്നു, ഇത് മിക്ക qPCR ഉപകരണങ്ങൾക്കും ബാധകമാണ്.വ്യത്യസ്ത ഉപകരണങ്ങളിൽ ROX ൻ്റെ സാന്ദ്രത ക്രമീകരിക്കേണ്ട ആവശ്യമില്ല.ആംപ്ലിഫിക്കേഷനായി പ്രതികരണ സംവിധാനം തയ്യാറാക്കാൻ പ്രൈമറുകളും ടെംപ്ലേറ്റുകളും ചേർക്കേണ്ടത് ആവശ്യമാണ്.
ഘടകങ്ങൾ
യൂണിവേഴ്സൽ ബ്ലൂ qPCR മാസ്റ്റർ മിക്സ്
സംഭരണ വ്യവസ്ഥകൾ
ഉൽപ്പന്നം ഐസ് പായ്ക്കുകൾ ഉപയോഗിച്ച് അയയ്‌ക്കുന്നു, കൂടാതെ -25℃~-15℃ 18 മാസത്തേക്ക് സൂക്ഷിക്കാം.പ്രതികരണ സംവിധാനം സംഭരിക്കുമ്പോഴോ തയ്യാറാക്കുമ്പോഴോ ശക്തമായ പ്രകാശ വികിരണം ഒഴിവാക്കേണ്ടത് ആവശ്യമാണ്.
സ്പെസിഫിക്കേഷൻ
| ഏകാഗ്രത | 2× |
| കണ്ടെത്തൽ രീതി | എസ്.വൈ.ബി.ആർ |
| PCR രീതി | qPCR |
| പോളിമറേസ് | ടാക്ക് ഡിഎൻഎ പോളിമറേസ് |
| സാമ്പിൾ തരം | ഡിഎൻഎ |
| ആപ്ലിക്കേഷൻ ഉപകരണങ്ങൾ | മിക്ക qPCR ഉപകരണങ്ങൾ |
| ഉൽപ്പന്ന തരം | തത്സമയ ഫ്ലൂറസെൻസ് ക്വാണ്ടിറ്റേറ്റീവ് PCR-നുള്ള SYBR പ്രീമിക്സ് |
| (അപേക്ഷ) അപേക്ഷിക്കുക | ജീൻ എക്സ്പ്രഷൻ |
നിർദ്ദേശങ്ങൾ
1.പ്രതികരണ സംവിധാനം
| ഘടകങ്ങൾ | വോളോം(μL) | വോളോം(μL) | അന്തിമ ഏകാഗ്രത |
| യൂണിവേഴ്സൽ SYBR ഗ്രീൻ qPCR പ്രീമിക്സ് | 25 | 10 | 1× |
| ഫോർവേഡ് പ്രൈമർ (10μmol/L) | 1 | 0.4 | 0.2μmol/L |
| റിവേഴ്സ് പ്രൈമർ (10μmol/L) | 1 | 0.4 | 0.2μmol/L |
| ഡിഎൻഎ | X | X | |
| ddH2O | 50 വരെ | 20 വരെ | - |
[ശ്രദ്ധിക്കുക]: ശക്തമായ കുലുക്കത്തിൽ നിന്ന് അമിതമായ കുമിളകൾ ഒഴിവാക്കാൻ ഉപയോഗിക്കുന്നതിന് മുമ്പ് നന്നായി ഇളക്കുക.
a) പ്രൈമർ കോൺസൺട്രേഷൻ: അന്തിമ പ്രൈമർ കോൺസൺട്രേഷൻ 0.2μmol/L ആണ്, കൂടാതെ 0.1 നും 1.0μmol/L നും ഇടയിൽ ക്രമീകരിക്കാവുന്നതാണ്.
b) ടെംപ്ലേറ്റ് കോൺസൺട്രേഷൻ: ടെംപ്ലേറ്റ് നേർപ്പിക്കാത്ത cDNA സ്റ്റോക്ക് സൊല്യൂഷനാണെങ്കിൽ, ഉപയോഗിച്ച വോളിയം qPCR പ്രതികരണത്തിൻ്റെ മൊത്തം വോളിയത്തിൻ്റെ 1/10 കവിയാൻ പാടില്ല.
സി) ടെംപ്ലേറ്റ് ഡൈല്യൂഷൻ: സിഡിഎൻഎ സ്റ്റോക്ക് സൊല്യൂഷൻ 5-10 തവണ നേർപ്പിക്കാൻ ശുപാർശ ചെയ്യുന്നു.ആംപ്ലിഫിക്കേഷൻ വഴി ലഭിക്കുന്ന Ct മൂല്യം 20-30 സൈക്കിളുകൾ ആയിരിക്കുമ്പോൾ ചേർത്ത ടെംപ്ലേറ്റിൻ്റെ ഒപ്റ്റിമൽ തുക നല്ലതാണ്.
d) പ്രതികരണ സംവിധാനം: ടാർഗെറ്റ് ജീൻ ആംപ്ലിഫിക്കേഷൻ്റെ ഫലപ്രാപ്തിയും ആവർത്തനക്ഷമതയും ഉറപ്പാക്കാൻ 20μL അല്ലെങ്കിൽ 50μL ഉപയോഗിക്കാൻ ശുപാർശ ചെയ്യുന്നു.
ഇ) സിസ്റ്റം തയ്യാറാക്കൽ: സൂപ്പർ ക്ലീൻ ബെഞ്ചിൽ തയ്യാറാക്കി ന്യൂക്ലീസ് അവശിഷ്ടങ്ങൾ ഇല്ലാതെ നുറുങ്ങുകളും പ്രതികരണ ട്യൂബുകളും ഉപയോഗിക്കുക;ഫിൽട്ടർ കാട്രിഡ്ജുകൾ ഉപയോഗിച്ച് നുറുങ്ങുകൾ ഉപയോഗിക്കാൻ ശുപാർശ ചെയ്യുന്നു.ക്രോസ് മലിനീകരണവും എയറോസോൾ മലിനീകരണവും ഒഴിവാക്കുക.
2.പ്രതികരണ പരിപാടി
സ്റ്റാൻഡേർഡ് പ്രോഗ്രാം
| സൈക്കിൾ ഘട്ടം | താൽക്കാലികം. | സമയം | സൈക്കിളുകൾ |
| പ്രാരംഭ ഡീനാറ്ററേഷൻ | 95℃ | 2 മിനിറ്റ് | 1 |
| ഡീനാറ്ററേഷൻ | 95℃ | 10 സെ | 40 |
| അനീലിംഗ് / എക്സ്റ്റൻഷൻ | 60℃ | 30 സെ | |
| ഉരുകൽ കർവ് ഘട്ടം | ഇൻസ്ട്രുമെൻ്റ് ഡിഫോൾട്ടുകൾ | 1 | |
ദ്രുത പ്രോഗ്രാം
| സൈക്കിൾ ഘട്ടം | താൽക്കാലികം. | സമയം | സൈക്കിളുകൾ |
| പ്രാരംഭ ഡീനാറ്ററേഷൻ | 95℃ | 30 സെ | 1 |
| ഡീനാറ്ററേഷൻ | 95℃ | 3 സെ | 40 |
| അനീലിംഗ് / എക്സ്റ്റൻഷൻ | 60℃ | 20 സെ | |
| ഉരുകൽ കർവ് ഘട്ടം | ഇൻസ്ട്രുമെൻ്റ് ഡിഫോൾട്ടുകൾ | 1 | |
[ശ്രദ്ധിക്കുക]: ഫാസ്റ്റ് പ്രോഗ്രാം ബഹുഭൂരിപക്ഷം ജീനുകൾക്കും അനുയോജ്യമാണ്, കൂടാതെ വ്യക്തിഗത സങ്കീർണ്ണമായ ദ്വിതീയ ഘടന ജീനുകൾക്കായി സ്റ്റാൻഡേർഡ് പ്രോഗ്രാമുകൾ പരീക്ഷിക്കാവുന്നതാണ്.
എ) അനീലിംഗ് താപനിലയും സമയവും: പ്രൈമറിൻ്റെയും ടാർഗെറ്റ് ജീനിൻ്റെയും ദൈർഘ്യം അനുസരിച്ച് ക്രമീകരിക്കുക.
b) ഫ്ലൂറസെൻസ് സിഗ്നൽ ഏറ്റെടുക്കൽ (★): ഉപകരണത്തിൻ്റെ ഉപയോഗത്തിനുള്ള നിർദ്ദേശങ്ങളിലെ ആവശ്യകതകൾക്കനുസൃതമായി പരീക്ഷണാത്മക നടപടിക്രമം സജ്ജമാക്കുക.
സി) മെൽറ്റിംഗ് കർവ്: ഇൻസ്ട്രുമെൻ്റ് ഡിഫോൾട്ട് പ്രോഗ്രാം സാധാരണയായി ഉപയോഗിക്കാവുന്നതാണ്.
3. ഫല വിശകലനം
അളവ് പരീക്ഷണങ്ങൾക്ക് കുറഞ്ഞത് മൂന്ന് ബയോളജിക്കൽ റെപ്ലിക്കേറ്റുകളെങ്കിലും ആവശ്യമാണ്.പ്രതികരണത്തിന് ശേഷം, ആംപ്ലിഫിക്കേഷൻ കർവ്, മെൽറ്റിംഗ് കർവ് എന്നിവ സ്ഥിരീകരിക്കേണ്ടതുണ്ട്.
3.1 ആംപ്ലിഫിക്കേഷൻ കർവ്:
സ്റ്റാൻഡേർഡ് ആംപ്ലിഫിക്കേഷൻ കർവ് എസ് ആകൃതിയിലാണ്.Ct മൂല്യം 20-നും 30-നും ഇടയിൽ കുറയുമ്പോൾ ക്വാണ്ടിറ്റേറ്റീവ് വിശകലനം ഏറ്റവും കൃത്യമാണ്. Ct മൂല്യം 10-ൽ കുറവാണെങ്കിൽ, ടെംപ്ലേറ്റ് നേർപ്പിച്ച് വീണ്ടും പരിശോധന നടത്തേണ്ടത് ആവശ്യമാണ്.Ct മൂല്യം 30-35 ന് ഇടയിലായിരിക്കുമ്പോൾ, ആംപ്ലിഫിക്കേഷൻ കാര്യക്ഷമത മെച്ചപ്പെടുത്തുന്നതിനും ഫല വിശകലനത്തിൻ്റെ കൃത്യത ഉറപ്പാക്കുന്നതിനും ടെംപ്ലേറ്റ് കോൺസൺട്രേഷനോ പ്രതികരണ സംവിധാനത്തിൻ്റെ വോളിയമോ വർദ്ധിപ്പിക്കേണ്ടത് ആവശ്യമാണ്.Ct മൂല്യം 35-ൽ കൂടുതലാണെങ്കിൽ, പരിശോധനാ ഫലങ്ങൾക്ക് ജീനിൻ്റെ പ്രകടനത്തെ അളവ്പരമായി വിശകലനം ചെയ്യാൻ കഴിയില്ല, പക്ഷേ ഗുണപരമായ വിശകലനത്തിനായി ഉപയോഗിക്കാം.
3.2 ഉരുകൽ വക്രം:
ഉരുകൽ വക്രത്തിൻ്റെ ഒറ്റ കൊടുമുടി സൂചിപ്പിക്കുന്നത് പ്രതികരണത്തിൻ്റെ പ്രത്യേകത നല്ലതാണെന്നും അളവ് വിശകലനം നടത്താമെന്നും;ഉരുകുന്ന വക്രം ഇരട്ട അല്ലെങ്കിൽ ഒന്നിലധികം കൊടുമുടികൾ കാണിക്കുന്നുവെങ്കിൽ, അളവ് വിശകലനം നടത്താൻ കഴിയില്ല.ഉരുകുന്ന വക്രം ഇരട്ട കൊടുമുടികൾ കാണിക്കുന്നു, കൂടാതെ ലക്ഷ്യമല്ലാത്ത കൊടുമുടി പ്രൈമർ ഡൈമറാണോ അതോ ഡിഎൻഎ അഗറോസ് ജെൽ ഇലക്ട്രോഫോറെസിസ് വഴിയുള്ള നോൺ-സ്പെസിഫിക് ആംപ്ലിഫിക്കേഷനാണോ എന്ന് വിലയിരുത്തേണ്ടത് ആവശ്യമാണ്.ഇത് ഒരു പ്രൈമർ ഡൈമർ ആണെങ്കിൽ, പ്രൈമർ കോൺസൺട്രേഷൻ കുറയ്ക്കാനോ ഉയർന്ന ആംപ്ലിഫിക്കേഷൻ കാര്യക്ഷമതയോടെ പ്രൈമറുകൾ പുനർരൂപകൽപ്പന ചെയ്യാനോ ശുപാർശ ചെയ്യുന്നു.ഇത് നോൺ-സ്പെസിഫിക് ആംപ്ലിഫിക്കേഷൻ ആണെങ്കിൽ, അനീലിംഗ് ടെമ്പറേച്ചർ വർദ്ധിപ്പിക്കുക, അല്ലെങ്കിൽ പ്രൈമറുകൾ പ്രത്യേകമായി പുനർരൂപകൽപ്പന ചെയ്യുക.
കുറിപ്പുകൾ
നിങ്ങളുടെ ആരോഗ്യവും സുരക്ഷയും ഉറപ്പാക്കാൻ ആവശ്യമായ പിപിഇ, ലാബ് കോട്ട്, കയ്യുറകൾ എന്നിവ ധരിക്കുക!
ഈ ഉൽപ്പന്നം ഗവേഷണ ഉപയോഗത്തിന് മാത്രമുള്ളതാണ്!
