ർനാസ് എ
Ribonuclease A (RNaseA) എന്നത് 13.7 kDa തന്മാത്രാ ഭാരമുള്ള 4 ഡൈസൾഫൈഡ് ബോണ്ടുകൾ അടങ്ങുന്ന ഒരു ഒറ്റ-ധാര പോളിപെപ്റ്റൈഡാണ്.RNase A എന്നത് ഒരു എൻഡോറിബോ ന്യൂക്ലീസാണ്, അത് C, U അവശിഷ്ടങ്ങളിൽ ഒറ്റത്തവണയുള്ള ആർഎൻഎയെ പ്രത്യേകമായി തരംതാഴ്ത്തുന്നു.പ്രത്യേകമായി, ഒരു ന്യൂക്ലിയോടൈഡിൻ്റെ 5′-റൈബോസും തൊട്ടടുത്തുള്ള പിരിമിഡൈൻ ന്യൂക്ലിയോടൈഡിൻ്റെ 3′-റൈബോസിലെ ഫോസ്ഫേറ്റ് ഗ്രൂപ്പും ചേർന്ന് രൂപംകൊണ്ട ഫോസ്ഫോഡിസ്റ്റർ ബോണ്ടിനെ പിളർപ്പ് തിരിച്ചറിയുന്നു, അങ്ങനെ 2, 3′-സൈക്ലിക് ഫോസ്ഫേറ്റുകൾക്ക് യോജിച്ച ജലവിശ്ലേഷണം ന്യൂക്ലിയോസൈഡ് ഫോസ്ഫേറ്റുകൾ (ഉദാ. pG-pG-pC-pA-pG പിജി-പിജി-പിസിപി, എ-പിജി എന്നിവ സൃഷ്ടിക്കുന്നതിന് RNase A വഴി പിളർന്നിരിക്കുന്നു).RNase A ആണ് സിംഗിൾ-സ്ട്രാൻഡഡ് RNA പിളർത്തുന്നതിൽ ഏറ്റവും സജീവമായത്.ശുപാർശ ചെയ്യുന്ന പ്രവർത്തന സാന്ദ്രത 1-100μG/mL ആണ്, വിവിധ പ്രതികരണ സംവിധാനങ്ങളുമായി പൊരുത്തപ്പെടുന്നു.കുറഞ്ഞ ഉപ്പ് സാന്ദ്രത (0-100 mM NaCl) RNA-DNA ഹൈബ്രിഡൈസേഷൻ വഴി രൂപംകൊണ്ട ഒറ്റ-ധാരയുള്ള RNA, ഇരട്ട-ധാരയുള്ള RNA, RNA ശൃംഖലകൾ മുറിക്കാൻ ഉപയോഗിക്കാം.എന്നിരുന്നാലും, ഉയർന്ന ലവണസാന്ദ്രതയിൽ (≥0.3 M), RNase A പ്രത്യേകമായി ഒറ്റ സ്ട്രോണ്ടഡ് ആർഎൻഎയെ മാത്രം പിളർത്തുന്നു.
പ്ലാസ്മിഡ് ഡിഎൻഎ അല്ലെങ്കിൽ ജീനോമിക് ഡിഎൻഎ തയ്യാറാക്കുന്ന സമയത്ത് ആർഎൻഎ നീക്കം ചെയ്യുന്നതിനായി ആർഎൻഎസെ എ ഏറ്റവും സാധാരണയായി ഉപയോഗിക്കുന്നു. തയ്യാറാക്കൽ പ്രക്രിയയിൽ ഡിനേസ് സജീവമാണോ അല്ലയോ എന്നത് പ്രതികരണത്തെ എളുപ്പത്തിൽ ബാധിക്കും.ഒരു വാട്ടർ ബാത്തിൽ തിളപ്പിക്കുന്ന പരമ്പരാഗത രീതി DNase പ്രവർത്തനം നിർജ്ജീവമാക്കാൻ ഉപയോഗിക്കാം.ഈ ഉൽപ്പന്നത്തിൽ DNase, പ്രോട്ടീസ് എന്നിവ അടങ്ങിയിട്ടില്ല, കൂടാതെ ഉപയോഗിക്കുന്നതിന് മുമ്പ് ചൂട് ചികിത്സ ആവശ്യമില്ല.കൂടാതെ, RNase പ്രൊട്ടക്ഷൻ അനാലിസിസ്, RNA സീക്വൻസ് അനാലിസിസ് തുടങ്ങിയ മോളിക്യുലാർ ബയോളജി പരീക്ഷണങ്ങളിലും ഈ ഉൽപ്പന്നം ഉപയോഗിക്കാം.
സംഭരണ വ്യവസ്ഥകൾ
ഉൽപ്പന്നം -25～-15℃-ൽ സൂക്ഷിക്കാം, 2 വർഷത്തേക്ക് സാധുതയുണ്ട്.
നിർദ്ദേശങ്ങൾ
RNase A സ്റ്റോറേജ് സൊല്യൂഷൻ തയ്യാറാക്കുന്നതിനുള്ള സാധാരണ രീതികളിൽ ഒന്നാണിത്.വഴിയും തയ്യാറാക്കാംലബോറട്ടറിയിലോ റഫറൻസ് സാഹിത്യത്തിലോ ഉള്ള പരമ്പരാഗത രീതികൾ അനുസരിച്ച് മറ്റ് രീതികൾ (ഉദാ10 mM Tris-HCl, pH 7.5 അല്ലെങ്കിൽ Tris-NaCl ലായനിയിൽ നേരിട്ട് ലയിക്കുന്നു)
1. RNase A സംഭരണ ലായനി 10 mg/mL തയ്യാറാക്കാൻ 10 mM സോഡിയം അസറ്റേറ്റ് (pH 5.2) ഉപയോഗിക്കുക
2. 15 മിനിറ്റ് 100 ℃ ചൂടാക്കൽ
3. ഊഷ്മാവിൽ തണുപ്പിക്കുക, 1/10 വോളിയം 1 M Tris-HCl (pH 7.4) ചേർക്കുക, അതിൻ്റെ pH 7.4 ആയി ക്രമീകരിക്കുക (ഇതിനായിഉദാഹരണത്തിന്, 500 ml 10g/ml RNase സ്റ്റോറേജ് സൊല്യൂഷൻ 1M Tris-HCL, PH7.4) ചേർക്കുക
4. ഫ്രീസുചെയ്‌ത സംഭരണത്തിനായി -20℃-ൽ സബ്-പാക്കേജ് ചെയ്‌തിരിക്കുന്നു, ഇത് 2 വർഷം വരെ സ്ഥിരതയുള്ളതാണ്.
[കുറിപ്പുകൾ]: ന്യൂട്രൽ സാഹചര്യങ്ങളിൽ RNaseA ലായനി തിളപ്പിക്കുമ്പോൾ, RNase മഴ രൂപപ്പെടും;കുറഞ്ഞ pH-ൽ ഇത് തിളപ്പിക്കുക, മഴയുണ്ടെങ്കിൽ, അത് നിരീക്ഷിക്കാൻ കഴിയും, ഇത് പ്രോട്ടീൻ മാലിന്യങ്ങളുടെ സാന്നിധ്യം മൂലമാകാം.തിളപ്പിച്ചതിനു ശേഷം അവശിഷ്ടം കണ്ടെത്തിയാൽ, ഹൈ-സ്പീഡ് സെൻട്രിഫ്യൂഗേഷൻ (13000rpm) വഴി മാലിന്യങ്ങൾ നീക്കം ചെയ്യാം, തുടർന്ന് ഫ്രീസിങ് സ്റ്റോറേജിനായി സബ്-പാക്ക് ചെയ്യാം.
ഉല്പ്പന്ന വിവരം
| പര്യായപദങ്ങൾ | Ribonuclease I;പാൻക്രിയാറ്റിക് റൈബോ ന്യൂക്ലീസ്;Ribonuclease 3'-pyrimidnooligonucleotidohydrolase;Rnase A;എൻഡോറിബോൺസീസ് ഐ |
| CAS നമ്പർ. | 9001-99-4 |
| രൂപഭാവം | വെളുത്ത ലിയോഫിലൈസ് ചെയ്ത പൊടി |
| തന്മാത്രാ ഭാരം | ~ 13.7kDa (അമിനോ ആസിഡ് സീക്വൻസ്) |
| പിഎച്ച് മൂല്യം | 7.6 (പ്രവർത്തന ശ്രേണി 6-10) |
| അനുയോജ്യമായ താപനില | 60℃ (ആക്‌റ്റിവിറ്റി പരിധി 15-70℃) |
| സജീവമാക്കുന്ന ഏജൻ്റ് | Na2+.കെ+ |
| ഇൻഹിബിറ്റർ | Rnase ഇൻഹിബിറ്റർ |
| നിഷ്ക്രിയമാക്കൽ രീതി | ചൂടാക്കി നിർജ്ജീവമാക്കാൻ കഴിയില്ല, സെൻട്രിഫ്യൂജ് കോളം ഉപയോഗിക്കാൻ നിർദ്ദേശിക്കുന്നു |
| ഉത്ഭവം | ബോവിൻ |
| ദ്രവത്വം | വെള്ളത്തിൽ ലയിക്കുന്ന (10mg/ml) |
| ഉണങ്ങുമ്പോൾ നഷ്ടം | ≤5.0% |
| എൻസൈം പ്രവർത്തനം | ≥60 കുനിറ്റ്സ് യൂണിറ്റുകൾ/mg |
| ഐസോഇലക്ട്രിക് പോയിൻ്റ് | 9.6 |
കുറിപ്പുകൾ
നിങ്ങളുടെ സുരക്ഷയ്ക്കും ആരോഗ്യത്തിനും വേണ്ടി, പ്രവർത്തനത്തിനായി ലാബ് കോട്ടുകളും ഡിസ്പോസിബിൾ കയ്യുറകളും ധരിക്കുക.
