വൈൽഡ് ടാക്ക് ഡിഎൻഎ പോളിമറേസ്
5′→3′ പോളിമറേസ് പ്രവർത്തനവും 5´ ഫ്ലാപ്പ് എൻഡോ ന്യൂക്ലീസ് പ്രവർത്തനവും ഉള്ള തെർമസ് അക്വാട്ടിക്കസ് YT-1-ൽ നിന്നുള്ള തെർമോസ്റ്റബിൾ ഡിഎൻഎ പോളിമറേസാണ് ടാക് ഡിഎൻഎ പോളിമറേസ്.
ഘടകങ്ങൾ
| ഘടകം | HC1010എ-01 | HC1010എ-02 | HC1010എ-03 | HC1010എ-04 |
| 10× ടാഖ് ബഫർ | 2×1 മില്ലി | 2×10 മില്ലി | 2×50 മില്ലി | 5×200 മില്ലി |
| Taq DNA പോളിമറേസ് (5 U/μL) | 0.1 മി.ലി | 1 മി.ലി | 5 മി.ലി | 5×10 മില്ലി |
സ്റ്റോറേജ് അവസ്ഥ
0 ഡിഗ്രി സെൽഷ്യസിൽ താഴെയുള്ള ഗതാഗതം, -25°C~-15°C-ൽ സൂക്ഷിക്കുക.
യൂണിറ്റ് നിർവ്വചനം
75 ഡിഗ്രി സെൽഷ്യസിൽ 30 മിനിറ്റിനുള്ളിൽ 15 nmol dNTP ആസിഡിൽ ലയിക്കാത്ത വസ്തുക്കളിൽ സംയോജിപ്പിക്കുന്ന എൻസൈമിൻ്റെ അളവാണ് ഒരു യൂണിറ്റ് നിർവചിച്ചിരിക്കുന്നത്.
ഗുണനിലവാര നിയന്ത്രണം
1.പ്രോട്ടീൻ പ്യൂരിറ്റി അസ്സെ (SDS-PAGE):Taq DNA പോളിമറേസിൻ്റെ പരിശുദ്ധി SDS-PAGE വിശകലനം വഴി ≥95% നിർണ്ണയിച്ചു.
2.Endonuclease പ്രവർത്തനം:കുറഞ്ഞത് 5 U Taq DNA പോളിമറേസ്, 1 μg λDNA 37 ℃ ന് 16 മണിക്കൂർ, നിർണ്ണയിക്കുന്നത് പോലെ കണ്ടെത്താനാകാത്ത തരംതാഴ്ത്തൽ ഉണ്ടാകില്ല.
3.Exonuclease പ്രവർത്തനം:1 μg λ -ഹിന്ദ് Ⅲ ഡൈജസ്റ്റ് ഡിഎൻഎ 37 ℃ ന് 16 മണിക്കൂർ കൊണ്ട് കുറഞ്ഞത് 5 U Taq DNA പോളിമറേസ് നിർണ്ണയിക്കുന്നത് പോലെ കണ്ടെത്താനാകാത്ത ശോഷണം ഉണ്ടാകില്ല.
4.നിക്കേസ് പ്രവർത്തനം:37 ഡിഗ്രി സെൽഷ്യസിൽ 16 മണിക്കൂർ നേരത്തേക്ക് 1 μg pBR322 DNA ഉള്ള Taq DNA പോളിമറേസിൻ്റെ ഏറ്റവും കുറഞ്ഞത് 5 U നിർണ്ണയിച്ചതുപോലെ കണ്ടെത്താനാകുന്ന ഡീഗ്രേഡേഷൻ ഉണ്ടാകില്ല.
5.RNase പ്രവർത്തനം:37°C താപനിലയിൽ 16 മണിക്കൂർ 1.6 μg MS2 RNA ഉള്ള Taq DNA പോളിമറേസിൻ്റെ ഏറ്റവും കുറഞ്ഞത് 5 U നിർണ്ണയിച്ചതുപോലെ കണ്ടെത്താനാകാത്ത അപചയത്തിന് കാരണമാകുന്നു.
6.ഇ.കോളിDNA:E. coli 16S rRNA ലോക്കസിനുള്ള പ്രത്യേക പ്രൈമറുകൾ ഉപയോഗിച്ച് TaqMan qPCR ഉപയോഗിച്ച് E. coli genomic DNA യുടെ സാന്നിധ്യത്തിനായി Taq DNA പോളിമറേസിൻ്റെ 5 U പരിശോധിക്കുന്നു.E. coli genomic DNA മലിനീകരണം ≤1 പകർപ്പാണ്.
7.പിസിആർ ആംപ്ലിഫിക്കേഷൻ (5.0 കെബി ലാംഡ ഡിഎൻഎ)- PCR ആംപ്ലിഫിക്കേഷൻ്റെ 25 സൈക്കിളുകൾക്കായി 5 യൂണിറ്റ് Taq DNA പോളിമറേസ് ഉള്ള 5 ng Lambda DNA അടങ്ങിയ 50 µL പ്രതികരണം പ്രതീക്ഷിക്കുന്ന 5.0 kb ഉൽപ്പന്നത്തിൽ കലാശിക്കുന്നു.
പ്രതികരണ സജ്ജീകരണം
| ഘടകങ്ങൾ | വ്യാപ്തം |
| ടെംപ്ലേറ്റ് ഡിഎൻഎa | ഓപ്ഷണൽ |
| 10 μM ഫോർവേഡ് പ്രൈമർ | 1 μL |
| 10 μM റിവേഴ്സ് പ്രൈമർ | 1 μL |
| dNTP മിക്സ് (10mM വീതം) | 1 μL |
| 10×ടാഖ് ബഫർ | 5 μL |
| ടാക്ക് ഡിഎൻഎ പോളിമറേസ്ബി | 0.25 μL |
| ന്യൂക്ലീസ് രഹിത വെള്ളം | 50 μL വരെ |
കുറിപ്പുകൾ:
1) വ്യത്യസ്ത ടെംപ്ലേറ്റുകളുടെ ഒപ്റ്റിമൽ പ്രതികരണ സാന്ദ്രത വ്യത്യസ്തമാണ്.50 µL പ്രതികരണ സംവിധാനത്തിൻ്റെ ശുപാർശിത ടെംപ്ലേറ്റ് ഉപയോഗം ഇനിപ്പറയുന്ന പട്ടിക കാണിക്കുന്നു.
| ഡിഎൻഎ | തുക |
| ജീനോമിക് | 1 ng-1 μg |
| പ്ലാസ്മിഡ് അല്ലെങ്കിൽ വൈറൽ | 1 പേജ്-1 എൻജി |
2) ടാക്ക് ഡിഎൻഎ പോളിമറേസിൻ്റെ ഒപ്റ്റിമൽ കോൺസൺട്രേഷൻ പ്രത്യേക ആപ്ലിക്കേഷനുകളിൽ 0.25 µL~1 µL വരെയാകാം.
പ്രതികരണംപ്രോഗ്രാം
| ഘട്ടം | താപനില(°C) | സമയം | സൈക്കിളുകൾ |
| പ്രാരംഭ ഡീനാറ്ററേഷൻa | 95 ℃ | 5 മിനിറ്റ് | - |
| ഡീനാറ്ററേഷൻ | 95 ℃ | 15-30 സെ | 30-35 സൈക്കിളുകൾ |
| അനീലിംഗ്ബി | 60 ℃ | 15 സെ | |
| വിപുലീകരണം | 72 ℃ | 1kb/മിനിറ്റ് | |
| അന്തിമ വിപുലീകരണം | 72 ℃ | 5 മിനിറ്റ് | - |
കുറിപ്പുകൾ:
1) പ്രാരംഭ ഡീനാറ്ററേഷൻ അവസ്ഥ മിക്ക ആംപ്ലിഫിക്കേഷൻ പ്രതിപ്രവർത്തനങ്ങൾക്കും അനുയോജ്യമാണ്, കൂടാതെ ടെംപ്ലേറ്റ് ഘടനയുടെ സങ്കീർണ്ണതയനുസരിച്ച് ഇത് പരിഷ്‌ക്കരിക്കാവുന്നതാണ്.ടെംപ്ലേറ്റ് ഘടന സങ്കീർണ്ണമാണെങ്കിൽ, പ്രാരംഭ ഡീനാറ്ററേഷൻ പ്രഭാവം മെച്ചപ്പെടുത്തുന്നതിന് പ്രീ-ഡീനാറ്ററേഷൻ സമയം 5 - 10 മിനിറ്റ് വരെ നീട്ടാവുന്നതാണ്.
2) പ്രൈമറിൻ്റെ Tm മൂല്യം അനുസരിച്ച് അനീലിംഗ് താപനില ക്രമീകരിക്കേണ്ടതുണ്ട്, ഇത് പ്രൈമറിൻ്റെ Tm മൂല്യത്തേക്കാൾ 3~5 ℃ കുറവാണ്;സങ്കീർണ്ണമായ ടെംപ്ലേറ്റുകൾക്കായി, കാര്യക്ഷമമായ ആംപ്ലിഫിക്കേഷൻ നേടുന്നതിന് അനീലിംഗ് താപനില ക്രമീകരിക്കുകയും വിപുലീകരണ സമയം നീട്ടുകയും ചെയ്യേണ്ടത് ആവശ്യമാണ്.
