സൂപ്പർസ്റ്റാർട്ട് qPCR Premix പ്ലസ്-UNG
പൂച്ച നമ്പർ: HCB5071E
സൂപ്പർസ്റ്റാർട്ട് qPCR Premix plus-UNG എന്നത് ലയോഫിലൈസേഷൻ പ്രക്രിയകൾക്കായി പ്രത്യേകം വികസിപ്പിച്ചെടുത്ത, പ്രോബ്-ബേസ്ഡ് ഡിറ്റക്ഷൻ ഉപയോഗിച്ച് റിയൽ ടൈം PCR ഗുണപരവും അളവ്പരവുമായ പ്രതികരണങ്ങൾക്കായി രൂപകൽപ്പന ചെയ്ത ഒരു പ്രത്യേക റിയാഗെൻ്റാണ്.ഇതിൽ ഒരു ഹോട്ട്-സ്റ്റാർട്ട് എൻസൈം Hotstart Taq plus (DG) അടങ്ങിയിരിക്കുന്നു, അതിൻ്റെ Taq എൻസൈം പ്രവർത്തനം ഊഷ്മാവിൽ അടച്ചിരിക്കുന്നു, കുറഞ്ഞ താപനിലയിൽ പ്രൈമർ നോൺ-സ്പെസിഫിക് അനീലിംഗ് അല്ലെങ്കിൽ പ്രൈമർ ഡൈമർ രൂപീകരണം മൂലമുണ്ടാകുന്ന നിർദ്ദിഷ്ടമല്ലാത്ത ആംപ്ലിഫിക്കേഷനെ ഫലപ്രദമായി തടയുന്നു, അങ്ങനെ മെച്ചപ്പെടുന്നു. ആംപ്ലിഫിക്കേഷൻ പ്രതികരണത്തിൻ്റെ പ്രത്യേകത.ക്യുപിസിആർ പ്രതിപ്രവർത്തനങ്ങളുടെ കാര്യക്ഷമതയും സെൻസിറ്റിവിറ്റിയും വളരെയധികം മെച്ചപ്പെടുത്തി, ദ്രുതഗതിയിലുള്ള ഹോട്ട്-സ്റ്റാർട്ടിംഗ് നേടുന്നതിന് ഈ റിയാജൻ്റ് ഒപ്റ്റിമൈസ് ചെയ്ത qPCR നിർദ്ദിഷ്ട ബഫറും UNG/dUTP ആൻ്റി-മലിനീകരണ വിരുദ്ധ സംവിധാനവും ഉപയോഗിക്കുന്നു.ഇതിന് വിപുലമായ അളവെടുപ്പ് മേഖലകളിൽ നല്ല നിലവാരമുള്ള വളവുകൾ നേടാനും കൃത്യമായി അളവ് നിർവഹിക്കാനും കഴിയും, ശേഷിക്കുന്ന പിസിആർ ഉൽപ്പന്നങ്ങൾ അല്ലെങ്കിൽ എയറോസോൾ മലിനീകരണം മൂലമുണ്ടാകുന്ന തെറ്റായ പോസിറ്റീവ് ആംപ്ലിഫിക്കേഷൻ ഫലപ്രദമായി തടയുന്നു.അപ്ലൈഡ് ബയോസിസ്റ്റംസ്, എപ്പൻഡോർഫ്, ബയോ-റാഡ്, റോഷ് തുടങ്ങിയ നിർമ്മാതാക്കളിൽ നിന്നുള്ള മിക്ക ഫ്ലൂറസെൻ്റ് ക്വാണ്ടിറ്റേറ്റീവ് പിസിആർ ഉപകരണങ്ങളുമായി ഈ റിയാജൻ്റ് പൊരുത്തപ്പെടുന്നു, കൂടാതെ ലയോഫിലൈസ് ചെയ്ത രൂപത്തിൽ നല്ല സ്ഥിരത പ്രകടിപ്പിക്കുകയും ചെയ്യുന്നു.
റീജൻ്റ് കോമ്പോസിഷൻ
1. 5×HotstartPremix പ്ലസ്-UNG (Mg2+സൗജന്യം) (ഡിജി)
2. 250 എംഎം എംജിസിഎൽ2
3. 4×ലൈപ്രൊട്ടക്ടൻ്റ് (ഓപ്ഷണൽ)
സംഭരണ വ്യവസ്ഥകൾ
-20 ഡിഗ്രിയിൽ ദീർഘകാല സംഭരണം;4℃ താപനിലയിൽ 3 മാസം വരെ സൂക്ഷിക്കാം.ഉപയോഗിക്കുന്നതിന് മുമ്പ് നന്നായി ഇളക്കുകആവർത്തിച്ചുള്ള മരവിപ്പിക്കലും ഉരുകലും ഒഴിവാക്കുക.
സൈക്ലിംഗ് പ്രോട്ടോക്കോൾ
| നടപടിക്രമം | താൽക്കാലികം. | സമയം | സൈക്കിൾ |
| ദഹനം | 50℃ | 2 മിനിറ്റ് | 1 |
| പോളിമറേസ് സജീവമാക്കൽ | 95℃ | 1~5 മിനിറ്റ് | 1 |
| ഡെനേച്ചർ | 95℃ | 10~20 സെ | 40-50 |
| അനീലിംഗ് ആൻഡ് എക്സ്റ്റൻഷൻ | 56~64℃ | 20~60 സെ | 40-50 |
qPCR ലിക്വിഡ് റിയാക്ഷൻ Syതണ്ട് തയ്യാറാക്കൽ
|
രചന |
25µL വോളിയം |
50µL വോളിയം |
അന്തിമ ഏകാഗ്രത |
| 5×HotstartPremix പ്ലസ്-UNG(എംജി2+സൗജന്യം) (ഡിജി) | 5µL | 10µL | 1× |
| 250എംഎം എംജിസിഎൽ2 | 0.45µL | 0.9µL | 4.5 എംഎം |
| 4× ലയോപ്രൊട്ടക്ടൻ്റ്1 | 6.25µL | 12.5µL | 1× |
| 25×പ്രൈമർ-പ്രോബ് മിക്സ്2 | 1µL | 2µL | 1× |
| ടെംപ്ലേറ്റ് ഡിഎൻഎ3 | —— | —— | —— |
| ddH2O | 25µL വരെ | 50µL വരെ | —— |
1. പ്രൈമറുകൾക്കുള്ള അന്തിമ സാന്ദ്രത 0.2μM സാധാരണയായി നല്ല ഫലങ്ങൾ നൽകുന്നു;പ്രതികരണ പ്രകടനം മോശമാകുമ്പോൾ, ആവശ്യാനുസരണം 0.2-1μM പരിധിക്കുള്ളിൽ പ്രൈമർ കോൺസൺട്രേഷൻ ക്രമീകരിക്കുക.ഒപ്റ്റിമൽ കോമ്പിനേഷനുകൾ കണ്ടെത്തുന്നതിന് ഗ്രേഡിയൻ്റ് പരീക്ഷണങ്ങളിലൂടെ പ്രോബ് കോൺസൺട്രേഷൻ സാധാരണയായി 0.1-0.3μM പരിധിക്കുള്ളിൽ ഒപ്റ്റിമൈസ് ചെയ്യുന്നു.
2. വിവിധ തരത്തിലുള്ള ടെംപ്ലേറ്റുകളിൽ അടങ്ങിയിരിക്കുന്ന ടാർഗെറ്റ് ജീനുകളുടെ കോപ്പി നമ്പർ വ്യത്യാസപ്പെടുന്നു;ആവശ്യമെങ്കിൽ, ഒപ്റ്റിമൽ ടെംപ്ലേറ്റ് കൂട്ടിച്ചേർക്കൽ തുക നിർണ്ണയിക്കാൻ ഗ്രേഡിയൻ്റ് ഡൈല്യൂഷൻ നടത്താം.
3. ഈ സംവിധാനം ലയോഫിലൈസ് ചെയ്യാവുന്നതാണ്;ഫ്രീസ്-ഡ്രൈയിംഗ് ആവശ്യകതകളില്ലാതെ ഉപഭോക്താക്കൾ ഈ സിസ്റ്റം ഉപയോഗിക്കുമ്പോൾ, 4× ലയോപ്രൊട്ടക്റ്റൻ്റ് തിരഞ്ഞെടുത്ത് ചേർക്കാവുന്നതാണ്; ഫ്രീസ്-ഡ്രൈഡ് ഉൽപ്പന്നങ്ങൾ ആവശ്യമുണ്ടെങ്കിൽ, ലിക്വിഡ് റിയാക്ടറുകളുടെ ഘട്ടം ഉൽപ്പന്ന പ്രകടന മൂല്യനിർണ്ണയം നടത്തുമ്പോൾ, ലയോഫിലൈസ് ചെയ്ത സിസ്റ്റം ഘടകങ്ങളുമായി സ്ഥിരത ഉറപ്പാക്കാൻ അത് 4× ലയോപ്രൊട്ടക്റ്റൻ്റ് ചേർക്കണം. ഫലങ്ങളും.
സിസ്റ്റം ഉപയോഗിക്കുമ്പോൾd ഫ്രീസ്-ഡ്രൈയിംഗിനായി, തയ്യാറാക്കുക സിസ്റ്റം as ഇനിപ്പറയുന്നവ:
| രചന | 25µL പ്രതികരണ സംവിധാനം |
| 5 ×HotstartPremix പ്ലസ്-UNG (Mg2+സൗജന്യം) (ഡിജി) | 5µL |
| 250എംഎം എംജിസിഎൽ2 | 0.45µL |
| 4× ലയോപ്രൊട്ടക്ടൻ്റ് | 6.25µL |
| 25×പ്രൈമർ-പ്രോബ് മിക്സ് | 1µL |
| ddH2O | 18~20µL വരെ |
* ഫ്രീസ്-ഡ്രൈയിംഗിന് മറ്റ് സംവിധാനങ്ങൾ ആവശ്യമുണ്ടെങ്കിൽ, ദയവായി പ്രത്യേകം പരിശോധിക്കുക.
ലയോഫിലൈസേഷൻ പ്രക്രിയss
| നടപടിക്രമം | താൽക്കാലികം. | സമയം | അവസ്ഥ | സമ്മർദ്ദം |
| പ്രീ-ഫ്രീസിംഗ് | 4℃ | 30 മിനിറ്റ് | പിടിക്കുക |
1 എടിഎം |
| -50℃ | 60 മിനിറ്റ് | തണുപ്പിക്കൽ | ||
| -50℃ | 180 മിനിറ്റ് | പിടിക്കുക | ||
| പ്രാഥമിക ഉണക്കൽ | -30℃ | 60 മിനിറ്റ് | ചൂടാക്കൽ |
ആത്യന്തിക വാക്വം |
| -30℃ | 70 മിനിറ്റ് | പിടിക്കുക | ||
| ദ്വിതീയ ഉണക്കൽ | 25℃ | 60 മിനിറ്റ് | ചൂടാക്കൽ |
ആത്യന്തിക വാക്വം |
| 25℃ | 300 മിനിറ്റ് | പിടിക്കുക |
2. മേൽപ്പറഞ്ഞ ലയോഫിലൈസേഷൻ പ്രക്രിയ റഫറൻസിനായി മാത്രമാണ്.വ്യത്യസ്ത ഉൽപ്പന്ന തരങ്ങൾക്കും വ്യത്യസ്ത ഫ്രീസ്-ഡ്രയറുകൾക്കും വ്യത്യസ്ത പാരാമീറ്ററുകൾ ഉണ്ട്, അതിനാൽ യഥാർത്ഥ പ്രകാരം ക്രമീകരണങ്ങൾ നടത്താംഉപയോഗ സമയത്ത് വ്യവസ്ഥകൾ.
3. വ്യത്യസ്ത ലയോഫിലൈസേഷൻ പ്രക്രിയകൾ വ്യത്യസ്ത ബാച്ച് വലുപ്പത്തിലുള്ള ലയോഫിലൈസ് ചെയ്‌തതിന് അനുയോജ്യമായേക്കാംഉൽപ്പന്നങ്ങൾ, അതിനാൽ വലിയ തോതിലുള്ള ഉൽപാദനത്തിനായി ഉപയോഗിക്കുമ്പോൾ മതിയായ പരിശോധന മൂല്യനിർണ്ണയം നടത്തണം.
ലയോഫിലൈസ് ഉപയോഗിക്കുന്നതിനുള്ള നിർദ്ദേശങ്ങൾd പൊടി
1. ലയോഫിലൈസ് ചെയ്ത പൊടി ചുരുക്കത്തിൽ സെൻട്രിഫ്യൂജ് ചെയ്യുക;
2. ലയോഫിലൈസ് ചെയ്ത പൊടിയിൽ ന്യൂക്ലിക് ആസിഡ് ടെംപ്ലേറ്റ് ചേർത്ത് 25µL വരെ വെള്ളം ചേർക്കുക;
3. സെൻട്രിഫ്യൂഗേഷൻ വഴി നന്നായി ഇളക്കി മെഷീനിൽ പ്രവർത്തിപ്പിക്കുക.
ഗുണനിലവാര നിയന്ത്രണം:
1. ഫങ്ഷണൽ ടെസ്റ്റിംഗ്: സെൻസിറ്റിവിറ്റി, പ്രത്യേകത, qPCR ൻ്റെ പുനരുൽപാദനക്ഷമത.
2. എക്സോജനസ് ന്യൂക്ലീസ് ആക്റ്റിവിറ്റി ഇല്ല, എക്സോജനസ് എൻഡോ / എക്സോന്യൂക്ലീസ് മലിനീകരണം ഇല്ല.
സാങ്കേതിക വിവരങ്ങൾ:
1. സൂപ്പർസ്റ്റാർട്ട് qPCR Premix plus-UNG ഒരു നോവൽ ഹോട്ട്-സ്റ്റാർട്ട് എൻസൈം ഉപയോഗിക്കുന്നു, അത് 1~5 മിനിറ്റിനുള്ളിൽ ദ്രുത ഹോട്ട്-സ്റ്റാർട്ടിംഗ് സാധ്യമാക്കുന്നു;പ്രത്യേക ബഫർ ഫോർമുലേഷനിലൂടെ ഇത് മൾട്ടിപ്ലക്സ് ഫ്ലൂറസെൻ്റ് ക്വാണ്ടിറ്റേറ്റീവ് പിസിആർ പ്രതികരണങ്ങൾക്ക് അനുയോജ്യമാണ്.
2. ഫ്ലൂറസെൻസ് ക്വാണ്ടിറ്റേറ്റീവ് പിസിആർ ലിമിറ്റ് ഡിറ്റക്ഷൻ, ആംപ്ലിഫിക്കേഷൻ കർവുകൾ നോർമലൈസേഷൻ, ഫ്ലൂറസെൻസ് മൂല്യം, ഉയർന്ന സെൻസിറ്റിവിറ്റി ഫ്ലൂറസെൻസ് ക്വാണ്ടിറ്റേറ്റീവ് പിസിആർ ഡിറ്റക്ഷൻ റിയാജൻ്റുകൾക്ക് അനുയോജ്യമായ, കുറഞ്ഞ കോൺസൺട്രേഷൻ ടെംപ്ലേറ്റുകളിൽ വ്യക്തമായ മെച്ചം നേടുക.
3. കുറഞ്ഞ അനീലിംഗ് താപനിലയോ 200bp ശകലങ്ങളോ ഉള്ള പ്രൈമറുകൾക്ക്, 3-ഘട്ട രീതി ശുപാർശ ചെയ്യുന്നു.
4. dUTP യുടെ ഉപയോഗക്ഷമതയും UNG എൻസൈമിനുള്ള സെൻസിറ്റിവിറ്റിയും വ്യത്യസ്ത ടാർഗെറ്റ് ജീനുകൾക്ക് വ്യത്യാസപ്പെട്ടിരിക്കുന്നു, അതിനാൽ യുഎൻജി സിസ്റ്റം ഉപയോഗിക്കുന്നത് കണ്ടെത്തൽ സംവേദനക്ഷമത കുറയുന്നതിന് ഇടയാക്കിയാൽ, പ്രതികരണ സംവിധാനം ക്രമീകരിക്കുകയും ഒപ്റ്റിമൈസ് ചെയ്യുകയും വേണം.സാങ്കേതിക പിന്തുണ ആവശ്യമാണെങ്കിൽ ഞങ്ങളുടെ കമ്പനിയുമായി ബന്ധപ്പെടുക.
5. ആംപ്ലിഫിക്കേഷന് മുമ്പും ശേഷവും സമർപ്പിത പ്രദേശങ്ങളും പൈപ്പറ്റുകളും ഉപയോഗിക്കുക, പ്രവർത്തന സമയത്ത് കയ്യുറകൾ ധരിക്കുക, അവ ഇടയ്ക്കിടെ മാറ്റിസ്ഥാപിക്കുക;PCR ഉൽപ്പന്നങ്ങൾ വഴിയുള്ള സാമ്പിളുകളുടെ മലിനീകരണം കുറയ്ക്കുന്നതിന് PCR പൂർത്തിയാക്കിയ ശേഷം പ്രതികരണ ട്യൂബ് തുറക്കരുത്.
