BsaI നിയന്ത്രണ എൻഡോ ന്യൂക്ലീസ്
വിവരണം
BsaI നിയന്ത്രണ എൻസൈം എന്നത് E.coli പ്രകടിപ്പിച്ച ബാസിലസ് സ്ഫേറിക്കസിലെ BspQI ജീൻ എൻകോഡ് ചെയ്ത റീകോമ്പിനന്റ് പ്രോട്ടീനിൽ നിന്ന് ഉരുത്തിരിഞ്ഞ ഒരു ടൈപ്പ് II നിയന്ത്രണ എൻഡോ ന്യൂക്ലീസാണ്.ജീൻ മാപ്പിംഗ്, ക്ലോണിംഗ്, മറ്റ് മേഖലകൾ എന്നിവയിൽ നിയന്ത്രണ എൻഡോ ന്യൂക്ലിയസുകൾ വ്യാപകമായി ഉപയോഗിക്കുന്നു.ഈ എൻസൈം കാര്യക്ഷമമായ ജീൻ ലീനിയറൈസേഷനായി ഡിഎൻഎയെ അതിവേഗം മുറിക്കുന്നു, ഒരു IIs നിയന്ത്രണ എൻഡോന്യൂക്ലീസ് നിയന്ത്രണ എൻഡോ ന്യൂക്ലീസ്, ബാസിലസ് സ്റ്റെറോതെർമോഫിലസിൽ നിന്നുള്ള ക്ലോണുചെയ്തതും പരിഷ്ക്കരിച്ചതുമായ BsaI ജീനിനെ വഹിക്കുന്ന ഒരു പുനഃസംയോജന ഇ.കോളി സ്ട്രെയിനിൽ നിന്നാണ് ഉരുത്തിരിഞ്ഞത്.നേറ്റീവ് എൻസൈമുകളുടെ അതേ പ്രത്യേകതയും കുറഞ്ഞ നക്ഷത്ര പ്രവർത്തനവും ഉള്ളവ.അതിന്റെ തിരിച്ചറിയൽ ക്രമവും പിളർപ്പ് സൈറ്റുകളും ഇപ്രകാരമാണ്:
5'······GGTCTC(N)········3'
3'······CCAGAG(NNNNN)······5'
കെമിക്കൽ ഘടന
ഉൽപ്പന്ന സവിശേഷതകൾ
• നിയന്ത്രണ എൻഡോന്യൂക്ലീസിന് ഉയർന്ന എൻസൈമാറ്റിക് പ്രവർത്തനം ഉണ്ട്, ദഹന പ്രതികരണം വേഗത്തിൽ പൂർത്തിയാക്കുന്നു.
• കൃത്യമായ "സ്കാൽപൽ" കട്ടിംഗ് ഉറപ്പാക്കാൻ കുറഞ്ഞ നോൺ-സ്പെസിഫിക് എൻഡോ ന്യൂക്ലീസ് പ്രവർത്തനം.
• ബിഎസ്എ സംവിധാനമില്ല, താപ ഉറവിട മലിനീകരണം കുറയ്ക്കുന്നു.
സ്പെസിഫിക്കേഷൻ
ടെസ്റ്റ് ഇനങ്ങൾ | സ്പെസിഫിക്കേഷനുകൾ |
എൻസൈം പ്രവർത്തനം | 20 U/µL |
ശുദ്ധി(SDS-പേജ്) | ≥95% |
Rnase | ഒന്നും കണ്ടെത്തിയില്ല |
നോൺ-സ്പെസിഫിക് DNase പ്രവർത്തനം | കണ്ടെത്തിയില്ല |
നക്ഷത്ര പ്രവർത്തനം | കണ്ടെത്തിയില്ല |
ലിഗേഷനും റീകട്ടിംഗും | ദഹനത്തിന് ശേഷം, ഡിഎൻഎ ശകലങ്ങൾ ലിഗേറ്റ് ചെയ്യാം.ഈ ലിഗേറ്റഡ് ശകലങ്ങൾ Bsal ഉപയോഗിച്ച് വീണ്ടും മുറിക്കാൻ കഴിയും. |
എൻഡോടോക്സിൻസ് (LAL-ടെസ്റ്റ്) | ≤10 EU/mg |
ഇ.കോളി ഡി.എൻ.എ | ≤1 പകർപ്പ്/2U |
ഗുണനിലവാര നിയന്ത്രണം
ശുദ്ധി ≥ 95%, DNase ഇല്ല, RNase പ്രവർത്തനം, ഹോസ്റ്റ് DNA അവശിഷ്ടം ≤ 100pg/mg, ഹോസ്റ്റ് പ്രോട്ടീൻ അവശിഷ്ടം ≤ -50ppm, എൻഡോടോക്സിൻ അവശിഷ്ടം ≤ 10EU/mg, പ്രോട്ടീസ് പ്രവർത്തനമില്ല, അണുവിമുക്തമായ, മൈകോപ്ലാസ്മ ഇല്ലാത്ത
അപേക്ഷ
പോളിയുടെ (A/T/C/G) അവസാനം ഒരു രേഖീയമായ DNA ശകലം തയ്യാറാക്കാൻ പ്ലാസ്മിഡ് ഡൈജസ്റ്റ് ചെയ്യുക;
ഇൻ വിട്രോ ട്രാൻസ്ക്രിപ്ഷന് മുമ്പ് പ്ലാസ്മിഡ് ടെംപ്ലേറ്റ് ലീനിയറൈസ് ചെയ്യുക;
നിയന്ത്രണ ഡൈജസ്റ്റ്;
യൂണിറ്റ് നിർവ്വചനം
1 മണിക്കൂറിനുള്ളിൽ 37°C താപനിലയിൽ 1 μg ആന്തരിക നിയന്ത്രണ ഡിഎൻഎ ദഹിപ്പിക്കാൻ ആവശ്യമായ എൻസൈമിന്റെ അളവാണ് ഒരു യൂണിറ്റ് നിർവചിച്ചിരിക്കുന്നത്.
ഗതാഗതവും സംഭരണവും
ഗതാഗതം:-15 ഡിഗ്രി സെൽഷ്യസിനു താഴെ അയച്ചു
സംഭരണം:-25~-15°C താപനിലയിൽ സംഭരിക്കുക
ശുപാർശിത പുനഃപരിശോധന ജീവിതം:1 വർഷം