Hotstart Taq DNA പോളിമറേസ്
5′→3′ പോളിമറേസ് പ്രവർത്തനവും 5´ ഫ്ലാപ്പ് എൻഡോന്യൂക്ലീസ് പ്രവർത്തനവും ഉള്ള തെർമസ് അക്വാട്ടിക്കസ് YT-1-ൽ നിന്നുള്ള ഹോട്ട്-സ്റ്റാർട്ട് തെർമോസ്റ്റബിൾ ഡിഎൻഎ പോളിമറേസാണ് ഹോട്ട് സ്റ്റാർട്ട് ടാക്ക് ഡിഎൻഎ പോളിമറേസ് (ആൻ്റിബോഡി മോഡിഫിക്കേഷൻ).ഹോട്ട്-സ്റ്റാർട്ട് ടാക്ക് ഡിഎൻഎ പോളിമറേസ് ഒരു ടാക്ക് ഡിഎൻഎ പോളിമറേസ് ആണ്, ഇത് തെർമോലബൈൽ ടാക്ക് ആൻ്റിബോഡികൾ വഴി പരിഷ്ക്കരിച്ചു.ആൻ്റിബോഡി പരിഷ്ക്കരണം പിസിആറിൻ്റെ പ്രത്യേകത, സംവേദനക്ഷമത, വിളവ് എന്നിവ വർദ്ധിപ്പിച്ചു.
ഘടകങ്ങൾ
| ഘടകം | HC1012എ-01 | HC1012എ-02 | HC1012എ-03 | HC1012എ-04 |
| 5×HC ടാക്ക് ബഫർ | 4×1 മില്ലി | 4×10 മില്ലി | 4×50 മില്ലി | 5×400 മില്ലി |
| ഹോട്ട് സ്റ്റാർട്ട് ടാക്ക് ഡിഎൻഎ പോളിമറേസ് (ആൻ്റിബോഡി പരിഷ്ക്കരിച്ചത്) (5 U/μL) | 0.1 മി.ലി | 1 മി.ലി | 5 മി.ലി | 10×5 മില്ലി |
അപേക്ഷകൾ
10 mM Tris-HCl (pH 7.4 at 25℃), 100 mM KCl, 0.1 mM EDTA, 1 mM dithiothreitol, 0.5% Tween20, 0.5% IGEPALCA-630, 50% ഗ്ലിസറോൾ.
സ്റ്റോറേജ് അവസ്ഥ
0 ഡിഗ്രി സെൽഷ്യസിൽ താഴെയുള്ള ഗതാഗതം, -25°C~-15°C-ൽ സൂക്ഷിക്കുക.
യൂണിറ്റ് നിർവ്വചനം
75 ഡിഗ്രി സെൽഷ്യസിൽ 30 മിനിറ്റിനുള്ളിൽ 15 nmol dNTP ആസിഡിൽ ലയിക്കാത്ത വസ്തുക്കളിൽ സംയോജിപ്പിക്കുന്ന എൻസൈമിൻ്റെ അളവാണ് ഒരു യൂണിറ്റ് നിർവചിച്ചിരിക്കുന്നത്.
ഗുണനിലവാര നിയന്ത്രണം
1.Endonuclease പ്രവർത്തനം:4 μg pUC19 DNA ഉള്ള 20 U എൻസൈം 37 ഡിഗ്രിയിൽ 4 മണിക്കൂർ നേരം ഇൻകുബേഷൻ ചെയ്യുന്നത് ജെൽ ഇലക്‌ട്രോഫോറെസിസ് നിർണ്ണയിക്കുന്നത് പോലെ ഡിഎൻഎയുടെ ഡിഗ്രേഡേഷൻ കണ്ടെത്താനായില്ല.
2.5 കെബി ലാംഡ പിസിആർ:200 µM dNTP കളുടെയും 0.2 µM പ്രൈമറുകളുടെയും സാന്നിധ്യത്തിൽ 1.25 യൂണിറ്റ് Taq DNA പോളിമറേസ് ഉള്ള 5 ng Lambda DNA യുടെ PCR ആംപ്ലിഫിക്കേഷൻ്റെ 25 സൈക്കിളുകൾ പ്രതീക്ഷിക്കുന്ന 5 kb ഉൽപ്പന്നത്തിന് കാരണമാകുന്നു.
3.Exonuclease പ്രവർത്തനം:10 nmol 5´-FAM ഒലിഗോ ന്യൂക്ലിയോടൈഡുമായി 30 മിനിറ്റ് നേരം 37℃-ൽ കുറഞ്ഞത് 12.5 U Taq DNA പോളിമറേസ് അടങ്ങിയ 50 µl പ്രതിപ്രവർത്തനത്തിൻ്റെ ഇൻകുബേഷൻ, 37℃ വിളവ് കണ്ടെത്താനാകുന്നില്ല.
4.RNase പ്രവർത്തനം:37 ഡിഗ്രി സെൽഷ്യസിൽ 2 മണിക്കൂർ 1μg ആർഎൻഎ ട്രാൻസ്‌ക്രിപ്‌റ്റുകളുള്ള 20 U എൻസൈം അടങ്ങിയ 10 µL പ്രതിപ്രവർത്തനത്തിൻ്റെ ഇൻകുബേഷൻ, ജെൽ ഇലക്‌ട്രോഫോറെസിസ് നിർണ്ണയിച്ച പ്രകാരം RNA യുടെ കണ്ടെത്താനാകാത്ത അപചയത്തിന് കാരണമാകില്ല.
5.ചൂട് നിർജ്ജീവമാക്കൽ:ഇല്ല.
പ്രതികരണ സംവിധാനം
| ഘടകങ്ങൾ | വ്യാപ്തം |
| ടെംപ്ലേറ്റ് ഡിഎൻഎa | ഓപ്ഷണൽ |
| 10 μM ഫോർവേഡ് പ്രൈമർ | 0.5 μL |
| 10 μM റിവേഴ്സ് പ്രൈമർ | 0.5 μL |
| dNTP മിക്സ് (10mM വീതം) | 0.5 μL |
| 5×HC ടാക്ക് ബഫർ | 5 μL |
| ടാക്ക് ഡിഎൻഎ പോളിമറേസ്ബി(5U/μL) | 0.125 μL |
| ന്യൂക്ലീസ് രഹിത വെള്ളം | 25 μL വരെ |
കുറിപ്പുകൾ:
1) എ.
| ഡിഎൻഎ | തുക |
| ജീനോമിക് | 1 ng-1 μg |
| പ്ലാസ്മിഡ് അല്ലെങ്കിൽ വൈറൽ | 1 പേജ്-1 എൻജി |
2) ബി.ടാക് ഡിഎൻഎ പോളിമറേസിൻ്റെ ഒപ്റ്റിമൽ കോൺസൺട്രേഷൻ പ്രത്യേക ആപ്ലിക്കേഷനുകളിൽ 5-50 യൂണിറ്റ്/എംഎൽ (0.1-0.5 യൂണിറ്റ്/25 µL പ്രതികരണം) വരെയാകാം.
തെർമൽ സൈക്ലിംഗ് പ്രോട്ടോക്കോൾ
പി.സി.ആർ
| ഘട്ടം | താപനില(°C) | സമയം | സൈക്കിളുകൾ |
| പ്രാരംഭ ഡീനാറ്ററേഷൻa | 95 ℃ | 1-3 മിനിറ്റ് | - |
| ഡീനാറ്ററേഷൻ | 95 ℃ | 15-30 സെ | 30-35 സൈക്കിളുകൾ |
| അനീലിംഗ്ബി | 45-68 ℃ | 15-60 സെ | |
| വിപുലീകരണം | 68℃ | 1kb/മിനിറ്റ് | |
| അന്തിമ വിപുലീകരണം | 68℃ | 5 മിനിറ്റ് | - |
കുറിപ്പുകൾ:
1) മിക്ക ആംപ്ലിഫിക്കേഷനുകൾക്കും 95 ഡിഗ്രി സെൽഷ്യസിൽ 1 മിനിറ്റ് പ്രാരംഭ ഡിനാറ്ററേഷൻ മതിയാകും.ബുദ്ധിമുട്ടുള്ള ടെംപ്ലേറ്റുകൾക്ക്, 95 ഡിഗ്രി സെൽഷ്യസിൽ 2-3 മിനിറ്റ് ദൈർഘ്യമുള്ള ഡീനാറ്ററേഷൻ ശുപാർശ ചെയ്യുന്നു.കോളനി പിസിആർ ഉപയോഗിച്ച്, 95 ഡിഗ്രി സെൽഷ്യസിൽ പ്രാരംഭ 5 മിനിറ്റ് ഡിനാറ്ററേഷൻ ശുപാർശ ചെയ്യുന്നു.
2) അനീലിംഗ് ഘട്ടം സാധാരണയായി 15-60 സെക്കൻ്റ് ആണ്.അനീലിംഗ് താപനില പ്രൈമർ ജോഡിയുടെ Tm അടിസ്ഥാനമാക്കിയുള്ളതാണ്, ഇത് സാധാരണയായി 45-68℃ ആണ്.
