Rnase ഇൻഹിബിറ്റർ
E.coli-ൽ നിന്ന് പ്രകടിപ്പിക്കുകയും ശുദ്ധീകരിക്കുകയും ചെയ്യുന്ന ഒരു പുനഃസംയോജന മ്യൂറൈൻ RNase ഇൻഹിബിറ്ററാണ് Murine RNase ഇൻഹിബിറ്റർ.നോൺ-കോവാലൻ്റ് ബോണ്ടിംഗ് വഴി ഇത് 1:1 അനുപാതത്തിൽ RNase A, B അല്ലെങ്കിൽ C എന്നിവയുമായി ബന്ധിപ്പിക്കുന്നു, അതുവഴി മൂന്ന് എൻസൈമുകളുടെ പ്രവർത്തനത്തെ തടയുകയും RNA യെ അപചയത്തിൽ നിന്ന് സംരക്ഷിക്കുകയും ചെയ്യുന്നു.എന്നിരുന്നാലും, ആസ്പർജില്ലസിൽ നിന്നുള്ള RNase 1, RNase T1, S1 ന്യൂക്ലീസ്, RNase H അല്ലെങ്കിൽ RNase എന്നിവയ്‌ക്കെതിരെ ഇത് ഫലപ്രദമല്ല.RT-PCR, RT-qPCR, IVT mRNA എന്നിവ ഉപയോഗിച്ച് മുരിൻ RNase ഇൻഹിബിറ്റർ പരീക്ഷിച്ചു, കൂടാതെ ഇത് വിവിധ വാണിജ്യ റിവേഴ്സ് ട്രാൻസ്ക്രിപ്റ്റേസുകൾ, DNA പോളിമറേസുകൾ, RNA പോളിമറേസുകൾ എന്നിവയുമായി പൊരുത്തപ്പെടുന്നു.
ഹ്യൂമൻ RNase ഇൻഹിബിറ്ററുകളുമായി താരതമ്യപ്പെടുത്തുമ്പോൾ, മ്യൂറൈൻ RNase ഇൻഹിബിറ്ററിൽ രണ്ട് സിസ്റ്റൈനുകൾ അടങ്ങിയിട്ടില്ല, ഇത് ഇൻഹിബിറ്ററിനെ നിർജ്ജീവമാക്കുന്നതിന് കാരണമാകുന്ന ഓക്സിഡേഷനോട് വളരെ സെൻസിറ്റീവ് ആണ്.അത് DTT യുടെ കുറഞ്ഞ സാന്ദ്രതയിൽ (1 mM-ൽ താഴെ) സ്ഥിരതയുള്ളതാക്കുന്നു.ഡിടിടിയുടെ ഉയർന്ന സാന്ദ്രത പ്രതിപ്രവർത്തനത്തിന് പ്രതികൂലമാകുന്ന പ്രതികരണങ്ങളിൽ (ഉദാ. തത്സമയ RT-PCR) ഈ സവിശേഷത ഉപയോഗിക്കുന്നതിന് അനുയോജ്യമാക്കുന്നു.
Aഅപേക്ഷ
RNA ഡീഗ്രേഡേഷൻ ഒഴിവാക്കാൻ RNase ഇടപെടൽ സാധ്യമാകുന്ന ഏതൊരു പരീക്ഷണത്തിലും ഈ ഉൽപ്പന്നം വ്യാപകമായി ഉപയോഗിക്കാവുന്നതാണ്, ഇനിപ്പറയുന്നവ:
1.cDNA, RT-PCR, RT-qPCR മുതലായവയുടെ ആദ്യ സ്‌ട്രാൻഡിൻ്റെ സമന്വയം.
2.ഇൻ വിട്രോ ട്രാൻസ്‌ക്രിപ്ഷൻ/ട്രാൻസ്‌ലേഷൻ സമയത്ത് (ഉദാ. ഇൻ വിട്രോ വൈറൽ റെപ്ലിക്കേഷൻ സിസ്റ്റം) ഡിഗ്രേഡേഷനിൽ നിന്ന് ആർഎൻഎയെ സംരക്ഷിക്കുന്നു.
3.ആർഎൻഎ വേർതിരിക്കലും ശുദ്ധീകരണ സമയത്തും RNase പ്രവർത്തനത്തെ തടയുന്നു.
സംഭരണ വ്യവസ്ഥകൾ
ഉൽപ്പന്നം -25～- 15 ഡിഗ്രി സെൽഷ്യസിൽ സൂക്ഷിക്കാം, 2 വർഷത്തേക്ക് സാധുതയുണ്ട്.
സംഭരണ ബഫർ
50 mM KCl, 20 mM HEPES-KOH (pH 7.6, 25 ℃), 8 mM DTT, 50% ഗ്ലിസറോൾ.
യൂണിറ്റ് നിർവചനം
5ng ribonuclease A യുടെ പ്രവർത്തനത്തെ 50% തടയാൻ ആവശ്യമായ murine RNase ഇൻഹിബിറ്ററിൻ്റെ അളവ് ഒരു യൂണിറ്റ് (U) ആയി നിർവചിച്ചിരിക്കുന്നു.
പ്രോട്ടീൻ്റെ തന്മാത്രാ ഭാരം
മുറൈൻ RNase ഇൻഹിബിറ്ററിൻ്റെ തന്മാത്രാ ഭാരം 50 kDa ആണ്.
ഗുണനിലവാര നിയന്ത്രണം
എക്സോന്യൂക്ലീസ് പ്രവർത്തനം:
1 μg λ-ഹൈൻഡ് III ഡൈജസ്റ്റ് ഡിഎൻഎ 37℃ ഉള്ള 40 U മ്യൂറിൻ RNase ഇൻഹിബിറ്റർ 16 മണിക്കൂർ നേരം അഗറോസ് ജെൽ ഇലക്ട്രോഫോറെസിസ് നിർണ്ണയിക്കുന്ന തരത്തിൽ ഡീഗ്രേഡേഷൻ നൽകുന്നില്ല.
എൻഡോ ന്യൂക്ലീസ് പ്രവർത്തനം:
40 U മറൈൻ RNase ഇൻഹിബിറ്റർ 1μg λ ഡിഎൻഎ 37℃ 16 മണിക്കൂർ നേരം അഗറോസ് ജെൽ ഇലക്ട്രോഫോറെസിസ് നിർണ്ണയിക്കുന്നത് പോലെ ഡീഗ്രേഡേഷൻ നൽകുന്നില്ല.
നിക്കിംഗ് പ്രവർത്തനം:
40U മ്യൂറൈൻ RNase ഇൻഹിബിറ്റർ 1μg pBR322 37 ഡിഗ്രിയിൽ 16 മണിക്കൂർ നേരം അഗറോസ് ജെൽ ഇലക്ട്രോഫോറെസിസ് നിർണ്ണയിക്കുന്നത് പോലെ ഡീഗ്രേഡേഷൻ നൽകുന്നില്ല.
RNase പ്രവർത്തനം:
1.6μg MS2 RNA ഉള്ള 40U മ്യൂറിൻ RNase ഇൻഹിബിറ്റർ 4h 37℃ ന് അഗറോസ് ജെൽ ഇലക്ട്രോഫോറെസിസ് നിർണ്ണയിക്കുന്നത് പോലെ ഡീഗ്രേഡേഷൻ നൽകുന്നില്ല.
E.കോളി ഡിഎൻഎ:
E. coli 16S rRNA ലോക്കസിനുള്ള പ്രത്യേക പ്രൈമറുകൾക്കൊപ്പം TaqMan qPCR ഉപയോഗിച്ച് E. coli genomic DNA യുടെ സാന്നിധ്യത്തിനായി 40 U മ്യൂറൈൻ RNase ഇൻഹിബിറ്റർ പരിശോധിക്കുന്നു.E. coli ജീനോമിക് DNA മലിനീകരണം ≤ 0.1 pg/40 U ആണ്.
Nഒട്ടെs
1. അക്രമാസക്തമായ ആന്ദോളനം അല്ലെങ്കിൽ ഇളക്കിവിടുന്നത് എൻസൈം നിർജ്ജീവമാക്കുന്നതിലേക്ക് നയിക്കും.
2.ഇൻഹിബിറ്ററിൻ്റെ ഒപ്റ്റിമൽ ടെമ്പറേച്ചർ റേഞ്ച് 25-55 ഡിഗ്രി സെൽഷ്യസായിരുന്നു, 65 ഡിഗ്രി സെൽഷ്യസിലും അതിനുമുകളിലും ഇത് പ്രവർത്തനരഹിതമാക്കി.
3. RNase H, RNase 1, RNase T1 എന്നിവയുടെ പ്രവർത്തനങ്ങൾ മ്യൂറിൻ RNase ഇൻഹിബിറ്റർ തടഞ്ഞില്ല.
4. RNase പ്രവർത്തനത്തിൻ്റെ തടസ്സം pH ൻ്റെ വിശാലമായ ശ്രേണിയിൽ കണ്ടെത്തി (pH 5-9 എല്ലാം സജീവമായിരുന്നു), ഏറ്റവും ഉയർന്ന പ്രവർത്തനം pH 7-8-ൽ നിരീക്ഷിക്കപ്പെട്ടു.
5. റൈബോ ന്യൂക്ലിയസുകൾ സാധാരണയായി ഡിനാറ്ററിംഗ് സാഹചര്യങ്ങളിൽ പ്രവർത്തനം നിലനിർത്തുന്നതിനാൽ, ഒരു റൈബോ ന്യൂക്ലീസുമായി സങ്കീർണ്ണമായ RNase ഇൻഹിബിറ്റർ തന്മാത്രകളെ ഡീനാറ്ററിംഗ് ഒഴിവാക്കാൻ ശ്രദ്ധിക്കണം.സജീവമായ റൈബോ ന്യൂക്ലീസിൻ്റെ പ്രകാശനം തടയുന്നതിന്, 50 ഡിഗ്രി സെൽഷ്യസിനു മുകളിലുള്ള താപനിലയും യൂറിയയുടെയോ മറ്റ് ഡിനാറ്ററിംഗ് ഏജൻ്റുകളുടെയോ ഉയർന്ന സാന്ദ്രതയും ഒഴിവാക്കണം.
