Bst 2.0 DNA പോളിമറേസ് (ഗ്ലിസറോൾ ഫ്രീ)
5′→3′ ഡിഎൻഎ പോളിമറേസ് പ്രവർത്തനവും ശക്തമായ ചെയിൻ റീപ്ലേസ്‌മെൻ്റ് പ്രവർത്തനവുമുള്ള ബാസിലസ് സ്റ്റെറോതെർമോഫിലസ് ഡിഎൻഎ പോളിമറേസ് I-ൽ നിന്നാണ് ബിഎസ്ടി ഡിഎൻഎ പോളിമറേസ് വി2 ഉരുത്തിരിഞ്ഞത്, എന്നാൽ 5′→3′ എക്‌സോന്യൂക്ലീസ് പ്രവർത്തനമില്ല.സ്ട്രാൻഡ്-ഡിസ്പ്ലേസ്മെൻ്റ്, ഐസോതെർമൽ ആംപ്ലിഫിക്കേഷൻ LAMP (ലൂപ്പ് മീഡിയേറ്റഡ് ഐസോതെർമൽ ആംപ്ലിഫിക്കേഷൻ), ദ്രുത ക്രമം എന്നിവയ്ക്ക് Bst DNA പോളിമറേസ് V2 അനുയോജ്യമാണ്.
ഘടകങ്ങൾ
| ഘടകം | HC5005A-01 | HC5005A-02 | HC5005A-03 |
| BstDNApolymerase V2(ഗ്ലിസറോൾ രഹിതം)(8U/μL) | 0.2 മി.ലി | 1 മി.ലി | 10 മി.ലി |
| 10×HC Bst V2 ബഫർ | 1.5 മി.ലി | 2×1.5 മില്ലി | 3×10 മില്ലി |
| MgSO4(100എംഎം) | 1.5 മി.ലി | 2×1.5 മില്ലി | 2×10 മില്ലി |
അപേക്ഷകൾ
1.LAMP ഐസോതെർമൽ ആംപ്ലിഫിക്കേഷൻ
2.ഡിഎൻഎ സ്ട്രാൻഡ് സിംഗിൾ ഡിസ്പ്ലേസ്മെൻ്റ് പ്രതികരണം
3.ഉയർന്ന ജിസി ജീൻ സീക്വൻസിങ്
4.ഡിഎൻഎ നാനോഗ്രാം ലെവലിൻ്റെ ക്രമം.
സ്റ്റോറേജ് അവസ്ഥ
0 ഡിഗ്രി സെൽഷ്യസിൽ താഴെയുള്ള ഗതാഗതം, -25°C~-15°C-ൽ സൂക്ഷിക്കുക.
യൂണിറ്റ് നിർവ്വചനം
65 ഡിഗ്രി സെൽഷ്യസിൽ 30 മിനിറ്റിനുള്ളിൽ 25 nmol dNTP ആസിഡ് ലയിക്കാത്ത വസ്തുക്കളിൽ സംയോജിപ്പിക്കുന്ന എൻസൈമിൻ്റെ അളവാണ് ഒരു യൂണിറ്റ് നിർവചിച്ചിരിക്കുന്നത്.
ഗുണനിലവാര നിയന്ത്രണം
1.പ്രോട്ടീൻ പ്യൂരിറ്റി അസ്സെ (SDS-PAGE):Coomassie Blue ഡിറ്റക്ഷൻ ഉപയോഗിച്ച് SDS-PAGE വിശകലനം വഴി Bst DNA പോളിമറേസ് V2 ൻ്റെ പരിശുദ്ധി ≥99% ആണ്.
2.Exonuclease പ്രവർത്തനം:1 μg λ -Hind Ⅲ ഡൈജസ്റ്റ് ഡിഎൻഎ 16 മണിക്കൂർ 37 ℃ ന് 8 U Bst DNA പോളിമറേസ് V2 അടങ്ങിയ 50 μL പ്രതിപ്രവർത്തനത്തിൻ്റെ ഇൻകുബേഷൻ നിർണ്ണയിച്ച പ്രകാരം കണ്ടെത്താനാകാത്ത അപചയത്തിന് കാരണമാകില്ല.
3.നിക്കേസ് പ്രവർത്തനം:കുറഞ്ഞത് 8 U Bst DNA പോളിമറേസ് V2 അടങ്ങിയ 50 μL പ്രതികരണത്തിൻ്റെ ഇൻകുബേഷൻ 1 μg pBR322 DNA ഉപയോഗിച്ച് 16 മണിക്കൂർ 37 ഡിഗ്രി സെൽഷ്യസിൽ നിർണ്ണയിച്ചതുപോലെ കണ്ടെത്താനാകാത്ത തരംതാഴ്ത്തൽ ഉണ്ടാകില്ല.
4.RNase പ്രവർത്തനം:കുറഞ്ഞത് 8 U Bst DNA പോളിമറേസ് V2 അടങ്ങിയ 50 μL പ്രതിപ്രവർത്തനത്തിൻ്റെ ഇൻകുബേഷൻ 1.6 μg MS2 RNA ഉപയോഗിച്ച് 37°C യിൽ 16 മണിക്കൂർ നേരം നിർണ്ണയിച്ചതുപോലെ കണ്ടെത്താനാകാത്ത ശോഷണം ഉണ്ടാകില്ല.
5.E. coli DNA:E. coli 16S rRNA ലോക്കസിനുള്ള പ്രത്യേക പ്രൈമറുകൾക്കൊപ്പം TaqMan qPCR ഉപയോഗിച്ച് E. coli genomic DNA യുടെ സാന്നിധ്യത്തിനായി 120 U Bst DNA പോളിമറേസ് V2 പരിശോധിക്കുന്നു.E. coli genomic DNA മലിനീകരണം ≤1 പകർപ്പാണ്.
ലാമ്പ് പ്രതികരണം
| ഘടകങ്ങൾ | 25μL |
| 10×HC Bst V2 ബഫർ | 2.5 μL |
| MgSO4 (100എംഎം) | 1.5 μL |
| dNTP-കൾ (10mM വീതം) | 3.5 μL |
| SYTO™ 16 പച്ച (25×)a | 1.0 μL |
| പ്രൈമർ മിക്സ്b | 6 μL |
| Bst DNA പോളിമറേസ് V2 (ഗ്ലിസറോൾ രഹിതം) (8 U/uL) | 1 μL |
| ടെംപ്ലേറ്റ് | × μL |
| ddH₂O | 25 μL വരെ |
കുറിപ്പുകൾ:
1) എ.SYTOTM 16 പച്ച (25×): പരീക്ഷണ ആവശ്യങ്ങൾക്കനുസരിച്ച്, മറ്റ് ചായങ്ങൾ പകരമായി ഉപയോഗിക്കാം;
2) ബി.പ്രൈമർ മിക്സ്: 20 µ M FIP, 20 µ M BIP, 2.5 µ M F3, 2.5 µ M B3, 5 µ M LF, 5 µ M LB എന്നിവയും മറ്റ് വോള്യങ്ങളും മിക്സ് ചെയ്‌ത് ലഭിക്കും.
പ്രതികരണവും അവസ്ഥയും
1 × HC Bst V2 ബഫർ, ഇൻകുബേഷൻ താപനില 60°C നും 65°C നും ഇടയിലാണ്.
ചൂട് നിഷ്ക്രിയമാക്കൽ
80 °C,20മിനിറ്റ്
