താപനില സെൻസിറ്റീവ് യുഎൻജി
ടെമ്പറേച്ചർ സെൻസിറ്റീവ് യുഎൻജി (ടിഎസ്-യുഎൻജി) ആണ് ഇ.എൻസൈം യൂറാസിൽ അടങ്ങിയ സിംഗിൾ, ഡബിൾ സ്ട്രാൻഡഡ് ഡിഎൻഎയിൽ നിന്ന് ഫ്രീ യുറാസിലിൻ്റെ പ്രകാശനം ഉത്തേജിപ്പിക്കുകയും ആർഎൻഎയ്‌ക്കെതിരെ നിഷ്‌ക്രിയവുമാണ്.E. coli ജീൻ ഉത്ഭവത്തിൻ്റെ പരമ്പരാഗത UNG എൻസൈമുമായി താരതമ്യപ്പെടുത്തുമ്പോൾ, TS-UNG എൻസൈമിന് താഴ്ന്ന ഊഷ്മാവിൽ (20℃~37℃) ഉയർന്ന പ്രവർത്തനമുണ്ട്, കൂടാതെ താപനില സെൻസിറ്റീവ് ആയതും എളുപ്പത്തിൽ നിർജ്ജീവമാക്കപ്പെടുന്നതുമാണ് (50℃), dUTP അടങ്ങിയ ആംപ്ലിഫിക്കേഷൻ്റെ അപചയം ഒഴിവാക്കുന്നു. പരമ്പരാഗത യുഎൻജി എൻസൈം പ്രവർത്തനരഹിതമാക്കിയതിന് ശേഷവും ശേഷിക്കുന്ന പ്രവർത്തനത്തിലൂടെ ഊഷ്മാവിൽ ഉൽപ്പന്നങ്ങൾ.അതിനാൽ, TS-UNG എൻസൈം PCR മലിനീകരണം തടയുന്നതിനുള്ള പ്രതികരണത്തിന് അനുയോജ്യം മാത്രമല്ല, RT-PCR ആംപ്ലിഫിക്കേഷൻ പ്രോഗ്രാമുമായി നന്നായി പൊരുത്തപ്പെടുകയും RT-PCR മലിനീകരണ പ്രതിരോധ പ്രതികരണത്തിൽ ഉപയോഗിക്കുകയും ചെയ്യുന്നു.
ശുപാർശ ചെയ്യുന്ന അപേക്ഷ
മലിനീകരണം തടയൽ വർദ്ധിപ്പിക്കൽ
സ്റ്റോറേജ് അവസ്ഥ
ദീർഘകാല സംഭരണത്തിനായി -20 ഡിഗ്രി സെൽഷ്യസ്, ഉപയോഗിക്കുന്നതിന് മുമ്പ് നന്നായി മിക്സ് ചെയ്യണം, ഇടയ്ക്കിടെ ഫ്രീസ്-ഥോവ് ഒഴിവാക്കുക.
സംഭരണ ബഫർ
20 mM Tris-HCl (pH 7.5), 100 mM NaCl, 0.1 mM EDTA, 1 mM DTT, സ്റ്റെബിലൈസർ, 50% ഗ്ലിസറോൾ.
യൂണിറ്റ് നിർവ്വചനം
37 ഡിഗ്രി സെൽഷ്യസിൽ 1 മണിക്കൂറിനുള്ളിൽ ഡിയു ബേസുകൾ അടങ്ങിയ 1µg സിംഗിൾ-സ്ട്രാൻഡഡ് ഡിഎൻഎയുടെ തരംതാഴ്ത്താൻ ആവശ്യമായ എൻസൈമിൻ്റെ അളവ് 1 യൂണിറ്റ് പ്രവർത്തനമാണ് (U).
ഗുണനിലവാര നിയന്ത്രണം
1.SDS-PAGE ഇലക്‌ട്രോഫോറെറ്റിക് പ്യൂരിറ്റി 98% ൽ കൂടുതലാണ്
2.ഡീഗ്രഡേഷൻ പ്രവർത്തനം, ബാച്ച്-ടു-ബാച്ച് നിയന്ത്രണം, സ്ഥിരത
3.എക്സോജനസ് ന്യൂക്ലീസ് പ്രവർത്തനമില്ല, എക്സോജനസ് എൻഡോ ന്യൂക്ലീസ് അല്ലെങ്കിൽ എക്സോന്യൂക്ലീസ് മലിനീകരണമില്ല.
നിർദ്ദേശങ്ങൾ
| ഘടകങ്ങൾ | വോളിയം (μL) | അന്തിമ ഏകാഗ്രത |
| 10 × PCR ബഫർ (dNTP സൗജന്യം, Mg²+സൗ ജന്യം) | 5 | 1× |
| dUTP-കൾ (dCTP, dGTP, dATP) | - | 200 μM |
| dUTP (dTTP മാറ്റിസ്ഥാപിക്കുക) | - | 200-600 μM |
| 25 എംഎം എംജിസിഎൽ2 | 2-8 μL | 1-4 മി.മീ |
| 5 U/μL ടാഖ് | 0.25 | 1.25 യു |
| 1 U/μLTS-UNG | 0.5 (0.1-0.5) | 0.5 U (0.1-0.5U) |
| 25 × പ്രൈമർ മിക്സ്എ | 2 | 1× |
| ടെംപ്ലേറ്റ് | - | 1μg/പ്രതികരണം |
| ddH₂O | 50 വരെ | - |
ശ്രദ്ധിക്കുക: a: qPCR/qRT-PCR-ന് ഉപയോഗിക്കുകയാണെങ്കിൽ, പ്രതികരണ സംവിധാനത്തിലേക്ക് ഫ്ലൂറസെൻ്റ് അന്വേഷണം ചേർക്കണം.സാധാരണയായി, 0.2 μM ൻ്റെ അന്തിമ പ്രൈമർ കോൺസൺട്രേഷൻ നല്ല ഫലങ്ങൾ നൽകും;പ്രതികരണ പ്രകടനം മോശമാകുമ്പോൾ, പ്രൈമർ കോൺസൺട്രേഷൻ 0.2-1 μM പരിധിയിൽ ക്രമീകരിക്കാം.സാധാരണയായി, പ്രോബ് കോൺസൺട്രേഷൻ 0.1-0.3 μM പരിധിയിലാണ് ഒപ്റ്റിമൈസ് ചെയ്തിരിക്കുന്നത്.പ്രൈമറിൻ്റെയും പ്രോബിൻ്റെയും മികച്ച സംയോജനം കണ്ടെത്താൻ കോൺസൺട്രേഷൻ ഗ്രേഡിയൻ്റ് പരീക്ഷണങ്ങൾ നടത്താം.
കുറിപ്പുകൾ
1.TS-UNG എൻസൈമിൻ്റെ ഒപ്റ്റിമൽ പ്രതികരണ താപനില താരതമ്യേന കുറവാണ്, ഇത് 20℃~37℃ പരിധിയിൽ ഒപ്റ്റിമൈസ് ചെയ്യാം, എൻസൈമിൻ്റെ അളവും പ്രതികരണ സമയവും 0.1~0.5 U, 5~ എന്ന പരിധിയിൽ ഒപ്റ്റിമൈസ് ചെയ്യാം. 10 മിനിറ്റ്;കൂടാതെ റിവേഴ്സ് ട്രാൻസ്ക്രിപ്ഷൻ പ്രക്രിയയിൽ എൻസൈം പ്രവർത്തനരഹിതമാക്കാം.
2.മലിനീകരണം തടയാൻ PCR, RT-PCR എന്നിവയ്ക്ക് അനുയോജ്യമാണ്.
3.ഇടയ്ക്കിടെ ഫ്രീസ്-ഥോവ് ഒഴിവാക്കുക, വലിയ താപനില വ്യതിയാനങ്ങൾക്ക് വിധേയമാകരുത്.
4.വർധിപ്പിക്കേണ്ട വ്യത്യസ്‌ത ജീനുകൾക്ക് dUTP യുടെ വ്യത്യസ്‌ത ഉപയോഗക്ഷമതയും UNG എൻസൈമിനുള്ള സംവേദനക്ഷമതയും ഉണ്ട്, അതിനാൽ, UNG സിസ്റ്റത്തിൻ്റെ ഉപയോഗം തിരിച്ചറിയൽ സംവേദനക്ഷമത കുറയുന്നതിന് ഇടയാക്കിയാൽ, പ്രതികരണ സംവിധാനം ക്രമീകരിക്കുകയും ഒപ്റ്റിമൈസ് ചെയ്യുകയും വേണം, നിങ്ങൾക്ക് സാങ്കേതിക പിന്തുണ ആവശ്യമുണ്ടെങ്കിൽ, ദയവായി ബന്ധപ്പെടുക. ഞങ്ങളുടെ സ്ഥാപനം.
