Rnase ഇൻഹിബിറ്റർ (ഗ്ലിസറോൾ ഫ്രീ)
E.coli-ൽ നിന്ന് പ്രകടിപ്പിക്കുകയും ശുദ്ധീകരിക്കുകയും ചെയ്യുന്ന ഒരു പുനഃസംയോജന മ്യൂറൈൻ RNase ഇൻഹിബിറ്ററാണ് Murine RNase ഇൻഹിബിറ്റർ.നോൺ-കോവാലൻ്റ് ബോണ്ടിംഗ് വഴി ഇത് 1:1 അനുപാതത്തിൽ RNase A, B അല്ലെങ്കിൽ C എന്നിവയുമായി ബന്ധിപ്പിക്കുന്നു, അതുവഴി മൂന്ന് എൻസൈമുകളുടെ പ്രവർത്തനത്തെ തടയുകയും RNA യെ അപചയത്തിൽ നിന്ന് സംരക്ഷിക്കുകയും ചെയ്യുന്നു.എന്നിരുന്നാലും, ആസ്പർജില്ലസിൽ നിന്നുള്ള RNase 1, RNase T1, S1 ന്യൂക്ലീസ്, RNase H അല്ലെങ്കിൽ RNase എന്നിവയ്‌ക്കെതിരെ ഇത് ഫലപ്രദമല്ല.RT-PCR, RT-qPCR, IVT mRNA എന്നിവ ഉപയോഗിച്ച് മുരിൻ RNase ഇൻഹിബിറ്റർ പരീക്ഷിച്ചു, കൂടാതെ ഇത് വിവിധ വാണിജ്യ റിവേഴ്സ് ട്രാൻസ്ക്രിപ്റ്റേസുകൾ, DNA പോളിമറേസുകൾ, RNA പോളിമറേസുകൾ എന്നിവയുമായി പൊരുത്തപ്പെടുന്നു.
ഹ്യൂമൻ RNase ഇൻഹിബിറ്ററുകളുമായി താരതമ്യപ്പെടുത്തുമ്പോൾ, മ്യൂറൈൻ RNase ഇൻഹിബിറ്ററിൽ രണ്ട് സിസ്റ്റൈനുകൾ അടങ്ങിയിട്ടില്ല, ഇത് ഇൻഹിബിറ്ററിനെ നിർജ്ജീവമാക്കുന്നതിന് കാരണമാകുന്ന ഓക്സിഡേഷനോട് വളരെ സെൻസിറ്റീവ് ആണ്.അത് DTT യുടെ കുറഞ്ഞ സാന്ദ്രതയിൽ (1 mM-ൽ താഴെ) സ്ഥിരതയുള്ളതാക്കുന്നു.ഡിടിടിയുടെ ഉയർന്ന സാന്ദ്രത പ്രതിപ്രവർത്തനത്തിന് പ്രതികൂലമാകുന്ന പ്രതികരണങ്ങളിൽ (ഉദാ. തത്സമയ RT-PCR) ഈ സവിശേഷത ഉപയോഗിക്കുന്നതിന് അനുയോജ്യമാക്കുന്നു.
Aഅപേക്ഷ
RNA ഡീഗ്രേഡേഷൻ ഒഴിവാക്കാൻ RNase ഇടപെടൽ സാധ്യമാകുന്ന ഏതൊരു പരീക്ഷണത്തിലും ഈ ഉൽപ്പന്നം വ്യാപകമായി ഉപയോഗിക്കാവുന്നതാണ്, ഇനിപ്പറയുന്നവ:
1.ഫസ്റ്റ്-സ്ട്രാൻഡ് cDNA സിന്തസിസ്, RT-PCR, RT-qPCR, മുതലായവ;
2. ഇൻ-വിട്രോ ട്രാൻസ്‌ക്രിപ്‌ഷൻ/ട്രാൻസ്‌ലേഷൻ (ഉദാഹരണത്തിന് വിട്രോയിലെ വൈറൽ റെപ്ലിക്കേഷൻ) എന്നിവയിലെ ഡീഗ്രേഡേഷനിൽ നിന്ന് ആർഎൻഎയെ സംരക്ഷിക്കുക;
3.ആർഎൻഎ ഐസൊലേഷനും ശുദ്ധീകരണ സമയത്തും RNase പ്രവർത്തനത്തെ തടയുന്നു.
സംഭരണ വ്യവസ്ഥകൾ
-25～-15℃-ൽ സംഭരിക്കുക;
ഫ്രീസ്-ഥോ സൈക്കിളുകൾ ≤ 5 തവണ;
1 വർഷത്തേക്ക് സാധുതയുണ്ട്.
യൂണിറ്റ് നിർവചനം
5 ng RNase A യുടെ പ്രവർത്തനത്തെ 50% തടയാൻ ആവശ്യമായ RNase ഇൻഹിബിറ്ററിൻ്റെ അളവാണ് ഒരു യൂണിറ്റിനെ നിർവചിച്ചിരിക്കുന്നത്.
തന്മാത്രാ ഭാരം
RNase Inhibitor (Glycerol-free) 50 kDa പ്രോട്ടീനാണ്.
ഗുണനിലവാര നിയന്ത്രണം
എക്സോന്യൂക്ലീസ് പ്രവർത്തനം:
37 ഡിഗ്രി സെൽഷ്യസിൽ 16 മണിക്കൂർ 1 μg λ-ഹിന്ദ് III ഡൈജസ്റ്റ് ഡിഎൻഎ ഉള്ള 40 U എൻസൈമിൻ്റെ ഇൻകുബേഷൻ, ജെൽ ഇലക്ട്രോഫോറെസിസ് നിർണ്ണയിക്കുന്നത് പോലെ ഡിഎൻഎയുടെ കണ്ടെത്താനാകാത്ത തരംതാഴ്ത്തലിന് കാരണമാകില്ല.
എൻഡോ ന്യൂക്ലീസ് പ്രവർത്തനം:
37 ഡിഗ്രി സെൽഷ്യസിൽ 16 മണിക്കൂർ 1 μg λ ഡിഎൻഎ ഉള്ള 40 U എൻസൈമിൻ്റെ ഇൻകുബേഷൻ, ജെൽ ഇലക്ട്രോഫോറെസിസ് നിർണ്ണയിക്കുന്നത് പോലെ ഡിഎൻഎയുടെ ഡിഎൻഎയുടെ ഡിഗ്രേഡേഷൻ കണ്ടെത്താനായില്ല.
നിക്കിംഗ് പ്രവർത്തനം:
40 U എൻസൈം 1 μg pBR322 ഉപയോഗിച്ച് 16 മണിക്കൂർ 37 ഡിഗ്രിയിൽ ഇൻകുബേഷൻ ചെയ്യുന്നത്, ജെൽ ഇലക്ട്രോഫോറെസിസ് നിർണ്ണയിക്കുന്ന ഡിഎൻഎയുടെ ഡിഎൻഎയുടെ കണ്ടെത്താനാകാത്ത ശോഷണത്തിന് കാരണമാകില്ല.
RNase പ്രവർത്തനം:
40 U എൻസൈം 1.6 μg MS2 RNA ഉപയോഗിച്ച് 37 ഡിഗ്രിയിൽ 4 മണിക്കൂർ ഇൻകുബേഷൻ ചെയ്യുന്നത് ജെൽ ഇലക്ട്രോഫോറെസിസ് നിർണ്ണയിച്ച പ്രകാരം RNA യുടെ കണ്ടെത്താനാകാത്ത അപചയത്തിന് കാരണമായില്ല.
E.കോളി ഡിഎൻഎ:
TaqMan qPCR ആണ് 40 U എൻസൈം കണ്ടെത്തുന്നത്.E.coli DNA ≤ 0. 1pg/40U ആണ്.
Nഒട്ടെs
1.എൻസൈം നിർജ്ജീവമാകുന്നത് തടയാൻ കുലുക്കുകയോ അക്രമാസക്തമായി ഇളക്കുകയോ ചെയ്യരുത്.
2.RNase ഇൻഹിബിറ്റർ 25℃ മുതൽ 55℃ വരെയുള്ള താപനിലയിൽ സജീവമാണ്, കൂടാതെ ≥65℃-ൽ നിർജ്ജീവമാകുന്നു.
3.RNase H, RNase 1, RNase T1 എന്നിവയുടെ പ്രവർത്തനം തടസ്സപ്പെടുന്നില്ല.
4. RNase പ്രവർത്തനത്തെ തടയുന്നതിനുള്ള pH ശ്രേണി വിശാലമാണ് (pH 5-9-ൽ സജീവമാണ്), pH 7-8-ൽ പരമാവധി പ്രവർത്തനം കാണിക്കുന്നു.
