ഡിഎൻഎ എക്സ്ട്രാക്ഷൻ മിനി കിറ്റ്

സംഭരണ ​​വ്യവസ്ഥകൾ

-15 ~ -25 ഡിഗ്രി സെൽഷ്യസിൽ സംഭരിക്കുകയും ഊഷ്മാവിൽ കൊണ്ടുപോകുകയും ചെയ്യുക.

ഘടകങ്ങൾ

ബഫർ ജിഡിപി:ഡിഎൻഎ ബൈൻഡിംഗ് ബഫർ.

ബഫർ GW:വാഷിംഗ് ബഫർ;ഉപയോഗിക്കുന്നതിന് മുമ്പ് കുപ്പിയിൽ സൂചിപ്പിച്ചിരിക്കുന്ന അളവിൽ സമ്പൂർണ്ണ എത്തനോൾ ചേർക്കുക.

എല്യൂഷൻ ബഫർ:എല്യൂഷൻ.

FastPure DNA മിനി നിരകൾ-G:ഡിഎൻഎ അഡോർപ്ഷൻ നിരകൾ.

ശേഖരണ ട്യൂബുകൾ 2 മില്ലി:ഫിൽട്രേറ്റിനുള്ള ശേഖരണ ട്യൂബുകൾ.

തയ്യാറാക്കിയ മെറ്റീരിയലുകൾ

1.5 മില്ലി അണുവിമുക്തമാക്കിയ ട്യൂബുകൾ, കേവല എത്തനോൾ, ഐസോപ്രൊപനോൾ (ഡിഎൻഎ ശകലം ≤100 ബിപി ആകുമ്പോൾ, 1 വോള്യം ചേർക്കുക

ഐസോപ്രോപനോൾ 1 വോള്യം ജെൽ വരെ), വാട്ടർ ബാത്ത്.

പരീക്ഷണ പ്രക്രിയ

ഉപയോഗിക്കുന്നതിന് മുമ്പ് ടാഗിൽ സൂചിപ്പിച്ചിരിക്കുന്നതുപോലെ ബഫർ GW നേർപ്പിക്കാൻ 80 മില്ലി എത്തനോൾ ചേർക്കുക, ഊഷ്മാവിൽ സൂക്ഷിക്കുക.

മെക്കാനിസം

1. പിസിആർ പ്രതികരണ പരിഹാരം

ജെൽ എക്‌സ്‌ട്രാക്ഷൻ സ്‌കീം: തുല്യ വോളിയം ബഫർ ജിഡിപി പിസിആർ പ്രതികരണ പരിഹാരം വീണ്ടെടുക്കൽ സ്കീം ചേർക്കുക:വോളിയത്തിൻ്റെ 5 മടങ്ങ് ബഫർ ചേർക്കുക

2. ജിഡിപി ജെല്ലിൻ്റെ അളവ് കണക്കാക്കുക (100  μl 100 മില്ലിഗ്രാമിന് തുല്യമാണ്)

ജെൽ പിരിച്ചുവിടുക

3. 50-55 വരെ ചൂടാക്കുക℃

4. ബൈൻഡ് വാഷ്

ബഫർ ജിഡിപിയുടെ 300 μL ചേർക്കുക*

700 μL ബഫർ GW ചേർക്കുക

700 μL ബഫർ GW ചേർക്കുക

5. എലൂട്ട്

20 - 30μL എല്യൂഷൻ ബഫർ അല്ലെങ്കിൽ ഡീയോണൈസ്ഡ് വെള്ളം ചേർക്കുക

കുറിപ്പുകൾ* ഈ ഘട്ടം കൂടാതെ PCR പ്രതികരണ ദ്രാവകം വീണ്ടെടുക്കൽ

ജെൽ എക്സ്ട്രാക്ഷൻ പ്രോഗ്രാം

1. ഡിഎൻഎ ശകലങ്ങൾ ഭിന്നിപ്പിക്കുന്നതിനുള്ള ഡിഎൻഎ ഇലക്‌ട്രോഫോറെസിസിനു ശേഷം, അഗാറോസ് ജെല്ലിൽ നിന്ന് അൾട്രാവയലറ്റ് ലൈറ്റിന് കീഴിൽ ഡിഎൻഎ ശകലത്തിൻ്റെ ഒറ്റ വര എക്‌സൈസ് ചെയ്യുക.ജെല്ലിൻ്റെ പ്രത്യക്ഷമായ ഈർപ്പം ആഗിരണം ചെയ്യാനും കഴിയുന്നത്ര അധിക അഗറോസ് നീക്കം ചെയ്തുകൊണ്ട് ജെൽ സ്ലൈസിൻ്റെ വലുപ്പം കുറയ്ക്കാനും ആഗിരണം ചെയ്യാവുന്ന പേപ്പർ ഉപയോഗിക്കാൻ ശുപാർശ ചെയ്യുന്നു.അതിൻ്റെ അളവ് കണക്കാക്കാൻ ജെൽ സ്ലൈസ് (മൈക്രോസെൻട്രിഫ്യൂജ് ട്യൂബ് ഇല്ലാതെ) തൂക്കുക: 100 മില്ലിഗ്രാം ജെൽസ്ലൈസിൻ്റെ അളവ് ഏകദേശം 100 μL ആണ്, സാന്ദ്രത 1g/ml ആണെന്ന് കരുതുക.

2. തുല്യ വോളിയം ബഫർ ജിഡിപി ചേർക്കുക, 7-10 മിനിറ്റ് 50~55℃ ഇൻകുബേറ്റ് ചെയ്യുക (ജെൽ വലുപ്പം അനുസരിച്ച്, ജെൽ പൂർണ്ണമായും അലിഞ്ഞുപോകുന്നതുവരെ ഇൻകുബേഷൻ സമയം ക്രമീകരിക്കുക).ഇൻകുബേഷൻ സമയത്ത് ട്യൂബ് 2 തവണ തിരിക്കുക.

Δ ബഫർ ജിഡിപിയുടെ 1-3 വോള്യങ്ങൾ ചേർക്കുന്നത് ഡിഎൻഎ വീണ്ടെടുക്കൽ കാര്യക്ഷമതയെ ബാധിക്കില്ല.ഡിഎൻഎ ശകലം വീണ്ടെടുക്കണമെങ്കിൽ <100 ബിപി, ബഫർ ജിഡിപിയുടെ 3 വാല്യങ്ങൾ ചേർക്കേണ്ടതുണ്ട്;ജെൽ സ്ലൈസ് പൂർണ്ണമായും അലിഞ്ഞുപോകുമ്പോൾ, 1 വോള്യം ഐസോപ്രോപനോൾ ചേർത്ത് നന്നായി ഇളക്കുക, തുടർന്ന് അടുത്ത ഘട്ടത്തിലേക്ക് തുടരുക.

3. ട്യൂബിൻ്റെ അടിയിലേക്ക് സാമ്പിൾ കൊണ്ടുവരാൻ സംക്ഷിപ്തമായി സെൻട്രിഫ്യൂജ് ചെയ്യുക, 2 മില്ലി കളക്ഷൻ ട്യൂബുകളിലേക്ക് ഫാസ്റ്റ്‌പ്യുവർ ഡിഎൻഎ മിനി കോളംസ്-ജി തിരുകുക, ലായനി പരമാവധി 700 μL ഒരു പ്രാവശ്യം ശ്രദ്ധാപൂർവ്വം കൈമാറുക.

ഫിൽട്ടറേഷൻ നിരകളിലേക്കുള്ള സമയം, 30-60 സെക്കൻ്റിനുള്ള 12,000 ആർപിഎമ്മിൽ (13,800 X g) അപകേന്ദ്രബലം.

4. ഫിൽട്രേറ്റ് ഉപേക്ഷിച്ച് കോളത്തിലേക്ക് 300 μL ബഫർ GDP ചേർക്കുക, 1 മിനിറ്റ് ഊഷ്മാവിൽ ഇൻകുബേറ്റ് ചെയ്യുക, 12,000 rpm-ൽ (13,800 X g) സെൻട്രിഫ്യൂജ് 30-60 സെക്കൻ്റ്.

5. ഫിൽട്രേറ്റ് ഉപേക്ഷിച്ച്, കോളത്തിലേക്ക് 700 μL ബഫർ GW ചേർക്കുക (മുൻകൂട്ടി എഥനോൾ ചേർത്തിട്ടുണ്ടോയെന്ന് പരിശോധിക്കുക!), 30-60 സെക്കൻഡ് നേരത്തേക്ക് 12,000 ആർപിഎമ്മിൽ (13,800 X g) സെൻട്രിഫ്യൂജ് ചെയ്യുക.

Δ അഡോർപ്ഷൻ കോളത്തിൻ്റെ ചുവരിന് ചുറ്റും ബഫർ GW ചേർക്കുക, അല്ലെങ്കിൽ ബഫർ GW ബാക്ക് കവർ ചേർത്ത് 2 - 3 തവണ തലകീഴായി മിക്‌സ് ചെയ്യുക, ഇത് ട്യൂബ് ഭിത്തിയോട് ചേർന്നിരിക്കുന്ന ഉപ്പ് പൂർണ്ണമായും ഫ്ലഷ് ചെയ്യാൻ സഹായിക്കും.

6. ഘട്ടം 5 ആവർത്തിക്കുക.

Δ രണ്ട് തവണ ബഫർ GW ഉപയോഗിച്ച് ഫ്ലഷ് ചെയ്യുന്നത് ഉപ്പ് പൂർണ്ണമായും നീക്കം ചെയ്യപ്പെടുകയും തുടർന്നുള്ള പരീക്ഷണങ്ങളിൽ ആഘാതം ഇല്ലാതാക്കുകയും ചെയ്യും.

7. ഫിൽട്രേറ്റ് ഉപേക്ഷിച്ച് ശൂന്യമായ കോളം 2 മിനിറ്റ് നേരത്തേക്ക് 12,000 ആർപിഎമ്മിൽ (13,800 X g) സെൻട്രിഫ്യൂജ് ചെയ്യുക.

8. വൃത്തിയുള്ള 1.5 മില്ലി മൈക്രോസെൻട്രിഫ്യൂജ് ട്യൂബിലേക്ക് കോളം തിരുകുക, കോളം മെംബ്രണിൻ്റെ മധ്യഭാഗത്ത് 20 - 30 μL എല്യൂഷൻ ബഫർ ചേർക്കുക, 2 മിനിറ്റ് ഇൻകുബേറ്റ് ചെയ്യുക, തുടർന്ന് 1 മിനിറ്റിന് 12,000 ആർപിഎമ്മിൽ (13,800 X g) സെൻട്രിഫ്യൂജ് ചെയ്യുക.കോളം ഉപേക്ഷിക്കുക, ലഭിച്ച ഡിഎൻഎ -20 ൽ സൂക്ഷിക്കുക.

Δ സ്റ്റെപ്പ് 8-ൻ്റെ സൂപ്പർനാറ്റൻ്റ് വീണ്ടും എല്യൂട്ടുചെയ്യാൻ കോളത്തിലേക്ക് മാറ്റുകയും എല്യൂഷൻ ബഫർ 55-ലേക്ക് പ്രീ-ഹീറ്റ് ചെയ്യുകയും (ഡിഎൻഎ ശകലം > 3 കെബി ആകുമ്പോൾ) വീണ്ടെടുക്കൽ കാര്യക്ഷമത വർദ്ധിപ്പിക്കുന്നതിന് സഹായകമായേക്കാം.

PCR ഉൽപ്പന്നങ്ങൾ വീണ്ടെടുക്കൽ പ്രോഗ്രാം

പിസിആർ ഉൽപ്പന്നങ്ങൾ, എൻസൈമാറ്റിക് റിയാക്ഷൻ സിസ്റ്റം, മറ്റ് ഡിഎൻഎ ക്രൂഡ് ഉൽപ്പന്നങ്ങൾ (ജനിതക ഡിഎൻഎ ഉൾപ്പെടെ) എന്നിവയിൽ നിന്നുള്ള ഡിഎൻഎ ശകലങ്ങൾ ശുദ്ധീകരിക്കുന്നതിന് ഈ പ്രോട്ടോക്കോൾ ബാധകമാണ്.ഈ പരിഹാരത്തിന് വിവിധ ന്യൂക്ലിയോടൈഡുകൾ, പ്രൈമറുകൾ, പ്രൈമർ ഡൈമറുകൾ, ഉപ്പ് തന്മാത്രകൾ, എൻസൈമുകൾ, മറ്റ് മാലിന്യങ്ങൾ എന്നിവ ഫലപ്രദമായി നീക്കംചെയ്യാൻ കഴിയും.

1. ചുരുക്കത്തിൽ സെൻട്രിഫ്യൂജ് PCR ഉൽപ്പന്നങ്ങൾ, എൻസൈമാറ്റിക് പ്രതികരണ പരിഹാരം, മറ്റ് ഡിഎൻഎ ക്രൂഡ് ഉൽപ്പന്നങ്ങൾ.പൈപ്പറ്റ് ഉപയോഗിച്ച് അവയുടെ അളവ് കണക്കാക്കുക, അണുവിമുക്തമാക്കിയ 1.5 മില്ലി അല്ലെങ്കിൽ 2 മില്ലി ട്യൂബിലേക്ക് മാറ്റുക.100 μL വരെ വോളിയം വരെ ddH2O ചേർക്കുക;ഉയർന്ന സാന്ദ്രതയുള്ള ജനിതക ഡിഎൻഎയ്ക്ക്, ddH2O ഉപയോഗിച്ച് 300 μL നേർപ്പിക്കുന്നത് വീണ്ടെടുക്കൽ കാര്യക്ഷമത മെച്ചപ്പെടുത്താൻ സഹായിക്കും.

2. ബഫർ ജിഡിപിയുടെ 5 വോള്യങ്ങൾ ചേർക്കുക, ഇൻവെർട്ടിംഗ് അല്ലെങ്കിൽ വോർട്ടക്സിംഗ് വഴി നന്നായി മിക്സ് ചെയ്യുക.താൽപ്പര്യമുള്ള DNA ശകലം>100 bp ആണെങ്കിൽ, അധികമായി 1.5 വോള്യങ്ങൾ (സാമ്പിളുകൾ + ബഫർ GDP) എത്തനോൾ ചേർക്കേണ്ടതുണ്ട്.

3. കളക്ഷൻ ട്യൂബിലേക്ക് കോളം തിരികെ ചേർക്കുക, മിക്‌സ്‌ട്രൂ കോളത്തിലേക്ക് മാറ്റുക, 12,000 ആർപിഎമ്മിൽ (13,800 ×g) സെൻട്രിഫ്യൂജ് 30 - 60 സെക്കൻ്റ്.മിശ്രിത ലായനിയുടെ അളവ്>700 µL ആണെങ്കിൽ, അഡ്‌സോർപ്‌ഷൻ കോളം വീണ്ടും ശേഖരണ ട്യൂബിലേക്ക് ഇടുക, ശേഷിക്കുന്ന പരിഹാരം അഡ്‌സോർപ്‌ഷൻ കോളത്തിലേക്ക് മാറ്റുക, 30 - 60 സെക്കൻഡ് നേരത്തേക്ക് 12,000 ആർപിഎമ്മിൽ (13,800 × g) സെൻട്രിഫ്യൂജ് ചെയ്യുക.

4. അടുത്ത പ്രകടനം 08- 1/ജെൽ എക്സ്ട്രാക്ഷൻ പ്രോഗ്രാമിൻ്റെ 5 - 8 ഘട്ടത്തെ സൂചിപ്പിക്കുന്നു.