UDG/UNG എൻസൈമുകൾ
UDG (uracil DNA glycosylase) ന് ssDNA, dsDNA എന്നിവയിലെ യുറാസിൽ ബേസും ഷുഗർ-ഫോസ്ഫേറ്റ് നട്ടെല്ലും തമ്മിലുള്ള എൻ-ഗ്ലൈക്കോസിഡിക് ലിങ്കിൻ്റെ ജലവിശ്ലേഷണത്തെ ഉത്തേജിപ്പിക്കാൻ കഴിയും.ഇതിന് എയറോസോൾ മലിനീകരണം എളുപ്പത്തിൽ നിയന്ത്രിക്കാൻ കഴിയും കൂടാതെ PCR, qPCR, RT-qPCR, LAMP തുടങ്ങിയ സാധാരണ മോളിക്യുലാർ ബയോളജി സിസ്റ്റങ്ങൾക്ക് അനുയോജ്യമാണ്.
സ്പെസിഫിക്കേഷനുകൾ
എക്സ്പ്രഷൻ ഹോസ്റ്റ് | യുറാസിൽ ഡിഎൻഎ ഗ്ലൈക്കോസൈലേസ് ജീനിനൊപ്പം റീകോമ്പിനൻ്റ് ഇ |
തന്മാത്രാ ഭാരം | 24. 8kDa |
ശുദ്ധി | ≥95% (SDS-പേജ്) |
ചൂട് നിഷ്ക്രിയമാക്കൽ | 95℃, 5~10 മിനിറ്റ് |
യൂണിറ്റ് നിർവ്വചനം | l μg dU അടങ്ങിയ dsDNA യുടെ ജലവിശ്ലേഷണം 30 മിനിറ്റിനുള്ളിൽ 25℃-ൽ ഉത്തേജിപ്പിക്കാൻ ആവശ്യമായ എൻസൈമിൻ്റെ അളവാണ് ഒരു യൂണിറ്റ് (U) നിർവചിച്ചിരിക്കുന്നത്. |
സംഭരണം
ഉൽപ്പന്നം -25℃~-15°C താപനിലയിൽ രണ്ട് വർഷത്തേക്ക് സൂക്ഷിക്കണം.
നിർദ്ദേശങ്ങൾ
1.ഇനിപ്പറയുന്ന സിസ്റ്റം അനുസരിച്ച് പിസിആർ പ്രതികരണ മിശ്രിതം തയ്യാറാക്കൽ
ഘടകങ്ങൾ | വോളിയം (μL) | അന്തിമ ഏകാഗ്രത |
10×PCR ബഫർ (Mg²+Plus) | 5 | 1× |
25 mmol/LMgCl | 3 | 1.5 mmol/L |
dUTP(10 mmol/L) | 3 | 0.6 mmol/L |
dCTP/dGTP/dATP/dTTP(10mmol/Leach) | 1 | 0.2 mmol/ലീച്ച് |
ടെംപ്ലേറ്റ് ഡിഎൻഎ | X | - |
പ്രൈമർ1 (10μmol/L) | 2 | 0.4 μmol/L |
പ്രൈമർ 2 (10μmol/L) | 2 | 0.4 μmol/L |
Taq DNA പോളിമറേസ് (5 U/μL) | 0. 5 | 0. 05 U/μL |
യുറാസിൽ ഡിഎൻഎ ഗ്ലൈക്കോസൈലേസ് (യുഡിജി/യുഎൻജി), 1 യു/μL | 1 | 1 U/μL |
ddH₂O | 50 വരെ | - |
കുറിപ്പ്: പരീക്ഷണാത്മക ആവശ്യകതകൾ അനുസരിച്ച്, dUTP യുടെ അന്തിമ സാന്ദ്രത 0.2-0.6 mmol/L നും 0.2 mmol/L dTTP നും ഇടയിൽ ക്രമീകരിക്കാം.
2.ആംപ്ലിഫിക്കേഷൻ നടപടിക്രമം
സൈക്കിൾ ഘട്ടം | താപനില | സമയം | സൈക്കിളുകൾ |
dU അടങ്ങിയ ടെംപ്ലേറ്റ് ഡീഗ്രഡേഷൻ | 25℃ | 10 മിനിറ്റ് | 1 |
UDG സജീവമാക്കൽ, ടെംപ്ലേറ്റ് പ്രാരംഭ ഡീനാറ്ററേഷൻ | 95℃ | 5~10 മിനിറ്റ് | 1 |
ഡീനാറ്ററേഷൻ | 95℃ | 10 സെ |
30-35 |
അനീലിംഗ് | 60℃ | 20 സെ | |
വിപുലീകരണം | 72℃ | 30സെക്കൻഡ്/കെബി | |
അന്തിമ വിപുലീകരണം | 72℃ | 5 മിനിറ്റ് | 1 |
കുറിപ്പ്: 25 ഡിഗ്രി സെൽഷ്യസിലുള്ള പ്രതികരണ സമയം 5-10 മിനിറ്റിനുള്ളിൽ പരീക്ഷണ ആവശ്യകതകൾക്കനുസരിച്ച് ക്രമീകരിക്കാവുന്നതാണ്.
കുറിപ്പുകൾ
1.മിക്ക PCR പ്രതികരണ ബഫറുകളിലും UDG സജീവമാണ്.
2.എൻസൈമുകൾ ഉപയോഗിക്കുമ്പോൾ ഒരു ഐസ്ബോക്സിലോ ഐസ് ബാത്തിലോ സൂക്ഷിക്കണം, ഉപയോഗത്തിന് ശേഷം ഉടൻ തന്നെ -20 ഡിഗ്രി സെൽഷ്യസിൽ സൂക്ഷിക്കണം.
3.നിങ്ങളുടെ ആരോഗ്യവും സുരക്ഷയും ഉറപ്പാക്കാൻ ആവശ്യമായ പിപിഇ, അത്തരം ലാബ് കോട്ടും കയ്യുറകളും ധരിക്കുക!