യുറാസിൽ ഡിഎൻഎ ഗ്ലൈക്കോസൈലേസ്
Uracil-DNA Glycosylase (UNG അല്ലെങ്കിൽ UDG) 25 kDa തന്മാത്രാ ഭാരമുള്ള E.coli യുടെ ഒരു പുനഃസംയോജന ക്ലോണാണ്.യുറാസിൽ അടങ്ങിയ സിംഗിൾ-സ്ട്രാൻഡഡ്, ഡബിൾ സ്ട്രാൻഡഡ് ഡിഎൻഎയിൽ നിന്ന് ഫ്രീ യുറാസിലിൻ്റെ പ്രകാശനം ഇത് ഉത്തേജിപ്പിക്കുന്നു, കൂടാതെ ആർഎൻഎയ്‌ക്കെതിരെ നിഷ്‌ക്രിയമാണ്, കൂടാതെ പിസിആർ ആംപ്ലിഫിക്കേഷൻ ഉൽപ്പന്നങ്ങളുടെ മലിനീകരണം തടയാൻ ഇത് ഉപയോഗിക്കാം.പിസിആർ റിയാക്ഷനിൽ ഡിടിടിപിക്ക് പകരം ഡിയുടിപി നൽകുകയും ഡിയു ബേസുകൾ അടങ്ങിയ പിസിആർ ആംപ്ലിഫിക്കേഷൻ ഉൽപ്പന്നം രൂപപ്പെടുകയും ചെയ്താൽ, എൻസൈമിന് യു ബേസുകളുടെ ഗ്ലൈക്കോസിഡിക് ബോണ്ടിനെ സിംഗിൾ-സ്ട്രാൻഡഡ്, ഡബിൾ സ്ട്രാൻഡഡ് എന്നിവയിൽ തിരഞ്ഞെടുത്ത് തകർക്കാൻ കഴിയും എന്ന വസ്തുതയെ അടിസ്ഥാനമാക്കിയുള്ളതാണ് പ്രവർത്തന തത്വം. ഡിഎൻഎ, പിസിആർ ആംപ്ലിഫിക്കേഷൻ ഉൽപ്പന്നത്തെ തരംതാഴ്ത്തുക.
ശുപാർശ ചെയ്യുന്ന അപേക്ഷ
മലിനീകരണം തടയൽ വർദ്ധിപ്പിക്കൽ
സ്റ്റോറേജ് അവസ്ഥ
ദീർഘകാല സംഭരണത്തിനായി -20 ഡിഗ്രി സെൽഷ്യസ്, ഉപയോഗിക്കുന്നതിന് മുമ്പ് നന്നായി മിക്സ് ചെയ്യണം, ഇടയ്ക്കിടെ ഫ്രീസ്-ഥോവ് ഒഴിവാക്കുക.
സംഭരണ ബഫർ
20 mM Tris-HCl (pH 8.0), 150 mM NaCl, 1 mM EDTA, 1 mM DTT, സ്റ്റെബിലൈസർ, 50% ഗ്ലിസറോൾ.
യൂണിറ്റ് നിർവ്വചനം
37 ഡിഗ്രി സെൽഷ്യസിൽ 1 മണിക്കൂറിനുള്ളിൽ ഡിയു ബേസുകൾ അടങ്ങിയ 1µg സിംഗിൾ-സ്ട്രാൻഡഡ് ഡിഎൻഎയെ തരംതാഴ്ത്താൻ ആവശ്യമായ എൻസൈമിൻ്റെ അളവ് 1 യൂണിറ്റാണ്.
ഗുണനിലവാര നിയന്ത്രണം
1.SDS-PAGE ഇലക്‌ട്രോഫോറെറ്റിക് പ്യൂരിറ്റി 98% ൽ കൂടുതലാണ്
2.ആംപ്ലിഫിക്കേഷൻ സെൻസിറ്റിവിറ്റി, ബാച്ച്-ടു-ബാച്ച് നിയന്ത്രണം, സ്ഥിരത
3.1U UNG 50℃-ൽ 2മിനിറ്റ് ചികിത്സിച്ച ശേഷം, 103 കോപ്പികളിൽ താഴെയുള്ള U അടങ്ങുന്ന ടെംപ്ലേറ്റ് പൂർണ്ണമായും ഡീഗ്രേഡ് ചെയ്യണം, കൂടാതെ ആംപ്ലിഫിക്കേഷൻ ഉൽപ്പന്നം നിർമ്മിക്കാൻ കഴിയില്ല.
4.എക്സോജനസ് ന്യൂക്ലീസ് പ്രവർത്തനമില്ല
നിർദ്ദേശങ്ങൾ
| ഘടകങ്ങൾ | വോളിയം (μL) | അന്തിമ ഏകാഗ്രത |
| 10 × PCR ബഫർ (dNTP സൗജന്യം, Mg²+സൗ ജന്യം) | 5 | 1× |
| dUTP-കൾ (dCTP, dGTP, dATP) | - | 200 μM |
| dUTP (dTTP മാറ്റിസ്ഥാപിക്കുക) | - | 200-600 μM |
| 25 എംഎം എംജിസിഎൽ2 | 2-8 μL | 1-4 മി.മീ |
| 5 U/μL ടാഖ് | 0.25 | 1.25 യു |
| 5 U/μL യുഎൻജി | 0.25 (0.1-0.5) | 0.25 U (0.1-0.5) |
| 25 × പ്രൈമർ മിക്സ്എ | 2 | 1× |
| ടെംപ്ലേറ്റ് | - | 1μg/പ്രതികരണം |
| ddH₂O | 50 വരെ | - |
കുറിപ്പ്: a: qPCR/qRT-PCR-ന് ഉപയോഗിക്കുകയാണെങ്കിൽ, ഫ്ലൂറസെൻ്റ് അന്വേഷണം പ്രതികരണ സംവിധാനത്തിലേക്ക് ചേർക്കണം.സാധാരണയായി, 0.2 μM ൻ്റെ അന്തിമ പ്രൈമർ കോൺസൺട്രേഷൻ നല്ല ഫലങ്ങൾ നൽകും;പ്രതികരണ പ്രകടനം മോശമാകുമ്പോൾ, പ്രൈമർ കോൺസൺട്രേഷൻ 0.2-1 μM പരിധിയിൽ ക്രമീകരിക്കാം.സാധാരണയായി, പ്രോബ് കോൺസൺട്രേഷൻ 0.1-0.3 μM പരിധിയിലാണ് ഒപ്റ്റിമൈസ് ചെയ്തിരിക്കുന്നത്.പ്രൈമറിൻ്റെയും പ്രോബിൻ്റെയും മികച്ച സംയോജനം കണ്ടെത്താൻ കോൺസൺട്രേഷൻ ഗ്രേഡിയൻ്റ് പരീക്ഷണങ്ങൾ നടത്താം.
കുറിപ്പുകൾ
1.പിസിആർ ആംപ്ലിഫിക്കേഷൻ പ്രതികരണത്തിന് മുമ്പുള്ള പ്രതികരണ സംവിധാനത്തിൽ നിന്ന് മലിനമായ ഡിയുടിപി ആംപ്ലിഫിക്കേഷൻ ഉൽപ്പന്നങ്ങൾ നീക്കം ചെയ്യാനും ഉൽപ്പന്ന മലിനീകരണം മൂലം തെറ്റായ പോസിറ്റീവ് ഫലങ്ങൾ ഒഴിവാക്കാനും യുഎൻജി എൻസൈം ഉപയോഗിക്കാം.
2.മലിനീകരണ വിരുദ്ധ PCR പ്രതിപ്രവർത്തനത്തിൽ UNG എൻസൈമിനുള്ള ഏറ്റവും അനുയോജ്യമായ താപനില സാധാരണയായി 2മിനിറ്റിന് 50℃ ആണ്;5മിനിറ്റിന് 95℃ ആണ് നിഷ്ക്രിയാവസ്ഥ.
3.ഇടയ്ക്കിടെ ഫ്രീസ്-ഥോവ് ഒഴിവാക്കുക, വലിയ താപനില വ്യതിയാനങ്ങൾക്ക് വിധേയമാകരുത്.
4.വർധിപ്പിക്കേണ്ട വ്യത്യസ്‌ത ജീനുകൾക്ക് dUTP യുടെ വ്യത്യസ്‌ത ഉപയോഗക്ഷമതയും UNG എൻസൈമിനുള്ള സംവേദനക്ഷമതയും ഉണ്ട്, അതിനാൽ, UNG സിസ്റ്റത്തിൻ്റെ ഉപയോഗം തിരിച്ചറിയൽ സംവേദനക്ഷമത കുറയുന്നതിന് ഇടയാക്കിയാൽ, പ്രതികരണ സംവിധാനം ക്രമീകരിക്കുകയും ഒപ്റ്റിമൈസ് ചെയ്യുകയും വേണം, നിങ്ങൾക്ക് സാങ്കേതിക പിന്തുണ ആവശ്യമുണ്ടെങ്കിൽ, ദയവായി ബന്ധപ്പെടുക. ഞങ്ങളുടെ സ്ഥാപനം.
