എം-എംഎൽവി റിവേഴ്സ് ട്രാൻസ്ക്രിപ്റ്റേസ്
RevScript റിവേഴ്സ് ട്രാൻസ്ക്രിപ്റ്റേസ് ലഭിക്കുന്നത് ജനിതക എഞ്ചിനീയറിംഗ് സാങ്കേതികവിദ്യയാണ്.ഇതിന് ഉയർന്ന സിഡിഎൻഎ സിന്തസിസ് ശേഷി, താപ സ്ഥിരത, പ്രതികരണ താപനില പരിധി (60 ഡിഗ്രി സെൽഷ്യസ് വരെ) ഉണ്ട്.സിന്തസൈസ് ചെയ്ത cDNA ഉൽപ്പന്നം 10 kb വരെയാണ്.ഇത് ടെംപ്ലേറ്റുകളുടെ അടുപ്പം വർദ്ധിപ്പിക്കുകയും സങ്കീർണ്ണമായ ദ്വിതീയ ഘടനയോ കുറഞ്ഞ കോപ്പി ജീനുകളോ ഉള്ള ആർഎൻഎ ടെംപ്ലേറ്റുകളുടെ റിവേഴ്സ് ട്രാൻസ്ക്രിപ്ഷന് അനുയോജ്യമാണ്.
ഘടകങ്ങൾ
| ഘടകം | HC2003 ബി (10,000U) | HC2003 ബി (5*10,000U) | HC2003 ബി (200,000U) |
| RevScript റിവേഴ്സ് ട്രാൻസ്ക്രിപ്റ്റേസ് (200U/μL) | 50 μL | 5×50 μL | 1 മി.ലി |
| 5 × RevScript ബഫർ | 250 μL | 1.25 മി.ലി | 5 മി.ലി |
സ്റ്റോറേജ് അവസ്ഥ
ഈ ഉൽപ്പന്നം 2 വർഷത്തേക്ക് -25°C~-15°C-ൽ സൂക്ഷിക്കണം.
യൂണിറ്റ് നിർവ്വചനം
ഒലിഗോ(dT) പ്രൈമറുകളായി ഉപയോഗിച്ച് 37 ഡിഗ്രി സെൽഷ്യസിൽ 10 മിനിറ്റിനുള്ളിൽ ഒരു യൂണിറ്റ് 1 nmol dTTP ആസിഡിൽ ലയിക്കാത്ത വസ്തുക്കളിൽ സംയോജിപ്പിക്കുന്നു.
പ്രതികരണ സജ്ജീകരണം
1.RNA ടെംപ്ലേറ്റിൻ്റെ ഡീനാറ്ററേഷൻ (ഈ ഘട്ടം ഓപ്ഷണൽ ആണ്, RNA ടെംപ്ലേറ്റിൻ്റെ ഡീനാറ്ററേഷൻ ദ്വിതീയ ഘടനകൾ തുറക്കാൻ സഹായിക്കുന്നു, ഇത് ആദ്യ സ്ട്രാൻഡ് cDNA യുടെ വിളവ് മെച്ചപ്പെടുത്തും.)
| ഘടകങ്ങൾ | വ്യാപ്തം (μL) |
| RNase സൗജന്യ ddH2O | 13 വരെ |
| ഒലിഗോ(dT)18 (50 μmol/L) അല്ലെങ്കിൽ റാൻഡം പ്രൈമർ (50 μmol/L) അല്ലെങ്കിൽ ജീൻ സ്പെസിഫിക് പ്രൈമറുകൾ (2 μmol/L) | 1 |
| അല്ലെങ്കിൽ 1 | |
| അല്ലെങ്കിൽ 1 | |
| RNA ടെംപ്ലേറ്റ് | X a |
കുറിപ്പുകൾ:
1) a: ആകെ RNA: 1-5 ug അല്ലെങ്കിൽ mRNA: 1-500 ng
2) 65 ഡിഗ്രി സെൽഷ്യസിൽ 5 മിനിറ്റ് ഇൻകുബേറ്റ് ചെയ്യുക, തുടർന്ന് 2 മിനിറ്റ് തണുപ്പിക്കാൻ ഉടൻ ഐസിൽ മാറ്റുക.പ്രതികരണ ദ്രാവകം ശേഖരിക്കുന്നതിനുള്ള ഹ്രസ്വമായ സെൻട്രിഫ്യൂഗേഷൻ, ഇനിപ്പറയുന്ന പട്ടികയിൽ കാണിച്ചിരിക്കുന്നതുപോലെ റിവേഴ്സ് ട്രാൻസ്ക്രിപ്ഷൻ പ്രതികരണ പരിഹാരം ചേർക്കുക.ഇളക്കാൻ സൌമ്യമായി പൈപ്പറ്റ്.
1.പ്രതികരണ മിശ്രിതം തയ്യാറാക്കൽ (20 μL വോളിയം)
| ഘടകങ്ങൾ | വ്യാപ്തം (μL) |
| മുമ്പത്തെ ഘട്ടത്തിൻ്റെ മിശ്രിതം | 13 |
| 5×ബഫർ | 4 |
| dNTP മിക്സ് (10nmol/L) | 1 |
| റിവേഴ്സ് ട്രാൻസ്ക്രിപ്റ്റേസ് (200 U/μL) | 1 |
| RNase ഇൻഹിബിറ്റർ (40 U/μL) | 1 |
1.ഇനിപ്പറയുന്ന വ്യവസ്ഥകളിൽ പ്രതികരണം നടത്തുക:
| താപനില (°C) | സമയം |
| 25 °Ca | 5 മിനിറ്റ് |
| 42 °Cb | 15-30 മിനിറ്റ് |
| 85 °Cc | 5 മിനിറ്റ് |
കുറിപ്പുകൾ:
1) എ.ക്രമരഹിതമായ ഹെക്‌സാമറുകൾ ഉപയോഗിക്കുന്നതിന് മാത്രം 25 ഡിഗ്രി സെൽഷ്യസിൽ 5 മിനിറ്റ് ഇൻകുബേറ്റിംഗ് ആവശ്യമാണ്.Oligo (dT) ഉപയോഗിക്കുമ്പോൾ ദയവായി ഈ ഘട്ടം ഒഴിവാക്കുക18അല്ലെങ്കിൽ ജീൻ സ്പെസിഫിക് പ്രൈമർ.
2) ബി.ശുപാർശ ചെയ്യുന്ന റിവേഴ്സ് ട്രാൻസ്ക്രിപ്ഷൻ താപനില 42°C ആണ്, സങ്കീർണ്ണമായ ദ്വിതീയ ഘടനകളോ ഉയർന്ന GC ഉള്ളടക്കമോ ഉള്ള ടെംപ്ലേറ്റുകൾക്ക്, പ്രതികരണ താപനില 50-55°C ആയി ഉയർത്താൻ ശുപാർശ ചെയ്യുന്നു.
3) സി.റിവേഴ്സ് ട്രാൻസ്ക്രിപ്റ്റേസ് നിർജ്ജീവമാക്കാൻ 85 ഡിഗ്രി സെൽഷ്യസിൽ 5 മിനിറ്റ് ചൂടാക്കുന്നു.
4) ഉൽപ്പന്നം നേരിട്ട് PCR അല്ലെങ്കിൽ qPCR പ്രതികരണങ്ങളിൽ ഉപയോഗിക്കാം, അല്ലെങ്കിൽ ഹ്രസ്വകാല സംഭരണത്തിനായി -20°C-ൽ സൂക്ഷിക്കാം.ദീർഘകാല സംഭരണത്തിനായി -80 ഡിഗ്രി സെൽഷ്യസിൽ ഉൽപ്പന്നങ്ങൾ സംഭരിക്കാനും സംഭരിക്കാനും ശുപാർശ ചെയ്യുന്നു.ഇടയ്ക്കിടെ ഫ്രീസ്-ഥോവ് ഒഴിവാക്കുക.
5) ഉൽപ്പന്നം ഒരു-ഘട്ട RT-qPCR-ന് അനുയോജ്യമാണ്, ഓരോ 25μL പ്രതികരണ സംവിധാനത്തിനും 10-20 U റിവേഴ്സ് ട്രാൻസ്ക്രിപ്റ്റേസ് ചേർക്കാൻ ശുപാർശ ചെയ്യുന്നു, അല്ലെങ്കിൽ യഥാർത്ഥ സാഹചര്യത്തിനനുസരിച്ച് റിവേഴ്സ് ട്രാൻസ്ക്രിപ്റ്റേസിൻ്റെ അളവ് ക്രമേണ വർദ്ധിപ്പിക്കുക.
കുറിപ്പുകൾ
1.പരീക്ഷണ പ്രദേശം വൃത്തിയായി സൂക്ഷിക്കുക;ഓപ്പറേഷൻ സമയത്ത് വൃത്തിയുള്ള കയ്യുറകളും മാസ്കുകളും ധരിക്കണം.പരീക്ഷണത്തിൽ ഉപയോഗിക്കുന്ന എല്ലാ ഉപഭോഗവസ്തുക്കളും RNase മലിനീകരണം തടയാൻ RNase ഫ്രീ ആയിരിക്കണം.
2.ആർഎൻഎ ഡീഗ്രേഡേഷൻ തടയാൻ എല്ലാ നടപടിക്രമങ്ങളും ഐസിൽ നടത്തണം.
3.റിവേഴ്സ് ട്രാൻസ്ക്രിപ്ഷൻ്റെ ഉയർന്ന കാര്യക്ഷമത ഉറപ്പാക്കാൻ ഉയർന്ന നിലവാരമുള്ള RNA സാമ്പിളുകൾ ശുപാർശ ചെയ്യുന്നു.
4.ഈ ഉൽപ്പന്നം ഗവേഷണ ഉപയോഗത്തിന് മാത്രമുള്ളതാണ്.
5.നിങ്ങളുടെ സുരക്ഷയ്ക്കായി ലാബ് കോട്ടുകളും ഡിസ്പോസിബിൾ കയ്യുറകളും ഉപയോഗിച്ച് പ്രവർത്തിക്കുക.
