M-MLV നിയോസ്ക്രിപ്റ്റ് റിവേഴ്സ് ട്രാൻസ്ക്രിപ്റ്റേസ്

നിയോസ്‌ക്രിപ്റ്റ് റിവേഴ്‌സ് ട്രാൻസ്‌ക്രിപ്‌റ്റേസ് എന്നത് മൊളോണി മ്യൂറിൻ ലുക്കീമിയ വൈറസിൻ്റെ ഉത്ഭവവും ഇ.കോളിയിലെ എക്‌സ്‌പ്രഷനും എം-എംഎൽവി ജീനിൻ്റെ മ്യൂട്ടേഷൻ സ്‌ക്രീനിംഗ് വഴി ലഭിച്ച ഒരു റിവേഴ്‌സ് ട്രാൻസ്‌ക്രിപ്റ്റേസ് ആണ്.എൻസൈം RNase H പ്രവർത്തനം നീക്കം ചെയ്യുന്നു, ഉയർന്ന താപനില സഹിഷ്ണുതയുണ്ട്, ഉയർന്ന താപനില റിവേഴ്സ് ട്രാൻസ്ക്രിപ്ഷന് അനുയോജ്യമാണ്.അതിനാൽ, ആർഎൻഎ ഉയർന്ന തലത്തിലുള്ള ഘടനയുടെയും സിഡിഎൻഎ സിന്തസിസിലെ നിർദ്ദിഷ്ടമല്ലാത്ത ഘടകങ്ങളുടെയും പ്രതികൂല ഫലങ്ങൾ ഇല്ലാതാക്കുന്നതിന് ഇത് സഹായകമാണ്, കൂടാതെ ഉയർന്ന സ്ഥിരതയും റിവേഴ്സ് ട്രാൻസ്ക്രിപ്ഷൻ സിന്തസിസ് കഴിവും ഉണ്ട്.എൻസൈമിന് ഉയർന്ന സ്ഥിരതയും റിവേഴ്സ് ട്രാൻസ്ക്രിപ്ഷൻ സിന്തസിസ് കഴിവും ഉണ്ട്.

ഘടകങ്ങൾ

1.200 U/μL നിയോസ്ക്രിപ്റ്റ് റിവേഴ്സ് ട്രാൻസ്ക്രിപ്റ്റേസ്

2.5 × ഫസ്റ്റ്-സ്ട്രാൻഡ് ബഫർ (ഓപ്ഷണൽ)

* 5 × ഫസ്റ്റ്-സ്ട്രാൻഡ് ബഫറിൽ dNTP അടങ്ങിയിട്ടില്ല, പ്രതികരണ സംവിധാനം തയ്യാറാക്കുമ്പോൾ dNTP-കൾ ചേർക്കുക

ശുപാർശ ചെയ്യുന്ന അപേക്ഷ

1.ഒരു ഘട്ടം qRT-PCR.

2.ആർഎൻഎ വൈറസ് കണ്ടെത്തൽ.

സ്റ്റോറേജ് അവസ്ഥ

ദീർഘകാല സംഭരണത്തിനായി -20 ഡിഗ്രി സെൽഷ്യസ്, ഉപയോഗിക്കുന്നതിന് മുമ്പ് നന്നായി മിക്സ് ചെയ്യണം, ഇടയ്ക്കിടെ ഫ്രീസ്-ഥോവ് ഒഴിവാക്കുക.

യൂണിറ്റ് നിർവ്വചനം

പോളി(A)•oligo(dT) ഉപയോഗിച്ച് ഒരു യൂണിറ്റ് 10 മിനിറ്റിനുള്ളിൽ 37°C താപനിലയിൽ 1 nmol dTTP സംയോജിപ്പിക്കുന്നു.₂₅ടെംപ്ലേറ്റ്/പ്രൈമർ ആയി.

ഗുണനിലവാര നിയന്ത്രണം

1.SDS-PAGE ഇലക്‌ട്രോഫോറെറ്റിക് പ്യൂരിറ്റി 98% ൽ കൂടുതലാണ്.

2.ആംപ്ലിഫിക്കേഷൻ സെൻസിറ്റിവിറ്റി, ബാച്ച്-ടു-ബാച്ച് നിയന്ത്രണം, സ്ഥിരത.

3.എക്സോജനസ് ന്യൂക്ലീസ് പ്രവർത്തനമില്ല, എക്സോജനസ് എൻഡോ ന്യൂക്ലീസ് അല്ലെങ്കിൽ എക്സോന്യൂക്ലീസ് മലിനീകരണമില്ല

ആദ്യ ചെയിൻ റിയാക്ഷൻ സൊല്യൂഷനുള്ള പ്രതികരണ സജ്ജീകരണം

1.പ്രതികരണ മിശ്രിതം തയ്യാറാക്കൽ

കുറിപ്പുകൾ:a/b: നിങ്ങളുടെ പരീക്ഷണാത്മക ആവശ്യങ്ങൾക്കനുസരിച്ച് വ്യത്യസ്ത തരം പ്രൈമറുകൾ തിരഞ്ഞെടുക്കുക.

2.65 ഡിഗ്രി സെൽഷ്യസിൽ 5 മിനിറ്റ് ചൂടാക്കി 2 മിനിറ്റ് ഐസിൽ വേഗത്തിൽ തണുക്കുക.

3.മുകളിലുള്ള സിസ്റ്റത്തിലേക്ക് ഇനിപ്പറയുന്ന ഘടകങ്ങൾ 20µL മൊത്തം വോള്യത്തിലേക്ക് ചേർത്ത് സൌമ്യമായി ഇളക്കുക:

4. ഇനിപ്പറയുന്ന വ്യവസ്ഥകൾക്കനുസൃതമായി പ്രതികരണം നടത്തുക:

(1) റാൻഡം പ്രൈമർ ഉപയോഗിക്കുകയാണെങ്കിൽ, പ്രതികരണം 25℃-ൽ 10മിനിറ്റ് നടത്തണം, തുടർന്ന് 50℃-ൽ 30~60മിനിറ്റ്;

(2) Oligo dT അല്ലെങ്കിൽ നിർദ്ദിഷ്ട പ്രൈമറുകൾ ഉപയോഗിക്കുകയാണെങ്കിൽ, പ്രതികരണം 50℃ 30-60 മിനിറ്റ് നേരത്തേക്ക് നടത്തണം.

5.നിയോസ്ക്രിപ്റ്റ് റിവേഴ്സ് ട്രാൻസ്ക്രിപ്റ്റേസ് പ്രവർത്തനരഹിതമാക്കാനും പ്രതികരണം അവസാനിപ്പിക്കാനും 5 മിനിറ്റ് 95℃ ചൂടാക്കുക.

6.പിസിആർ റിയാക്ഷനിലും ഫ്ലൂറസെൻസ് ക്വാണ്ടിറ്റേറ്റീവ് പിസിആർ റിയാക്ഷനിലും റിവേഴ്സ് ട്രാൻസ്ക്രിപ്ഷൻ ഉൽപ്പന്നങ്ങൾ നേരിട്ട് ഉപയോഗിക്കാം, അല്ലെങ്കിൽ ദീർഘകാലത്തേക്ക് -20℃ ൽ സൂക്ഷിക്കാം.

പിസിആർ ആർപ്രവർത്തനം:

1.പ്രതികരണ മിശ്രിതം തയ്യാറാക്കൽ

കുറിപ്പുകൾ:a: ആദ്യ ചെയിൻ പ്രതികരണ പരിഹാരം വളരെയധികം ചേർത്താൽ, PCR പ്രതികരണം തടസ്സപ്പെട്ടേക്കാം.

2.പിസിആർ പ്രതികരണ നടപടിക്രമം

കുറിപ്പുകൾ

1.42℃~55℃ പരിധിയിലുള്ള റിവേഴ്സ് ട്രാൻസ്ക്രിപ്ഷൻ താപനില ഒപ്റ്റിമൈസേഷന് അനുയോജ്യം.

2.ഇതിന് മികച്ച സ്ഥിരതയുണ്ട്, ഉയർന്ന താപനില റിവേഴ്സ് ട്രാൻസ്ക്രിപ്ഷൻ ആംപ്ലിഫിക്കേഷന് അനുയോജ്യമാണ്.കൂടാതെ, ആർഎൻഎയുടെ സങ്കീർണ്ണമായ ഘടനാപരമായ പ്രദേശങ്ങളിലൂടെ കാര്യക്ഷമമായി കടന്നുപോകുന്നതിന് ഇത് അനുകൂലമാണ്.കൂടാതെ, അത്ഒറ്റ-ഘട്ട മൾട്ടിപ്ലക്സ് ഫ്ലൂറസെൻസ് ക്വാണ്ടിറ്റേറ്റീവ് RT-PCR കണ്ടെത്തലിന് അനുയോജ്യമാണ്.

3.വിവിധ പിസിആർ ആംപ്ലിഫിക്കേഷൻ എൻസൈമുകളുമായുള്ള നല്ല പൊരുത്തവും ഉയർന്ന സെൻസിറ്റിവിറ്റി ആർടി-പിസിആർ പ്രതികരണങ്ങൾക്ക് അനുയോജ്യവുമാണ്.

4.ഉയർന്ന സംവേദനക്ഷമതയുള്ള ഒരു-ഘട്ട ഫ്ലൂറസെൻസ് ക്വാണ്ടിറ്റേറ്റീവ് RT-PCR പ്രതികരണത്തിന് അനുയോജ്യം, ഫലകങ്ങളുടെ കുറഞ്ഞ സാന്ദ്രതയുടെ കണ്ടെത്തൽ നിരക്ക് ഫലപ്രദമായി മെച്ചപ്പെടുത്തുന്നു.

5.cDNA ലൈബ്രറി നിർമ്മാണത്തിന് അനുയോജ്യം.