RT-LAMP കളർമെട്രിക് മാസ്റ്റർ മിക്സ് HCB5204A
ഈ ഉൽപ്പന്നത്തിൽ റിയാക്ഷൻ ബഫർ, ആർടി-എൻസൈംസ് മിക്സ് (ബിഎസ്ടി ഡിഎൻഎ പോളിമറേസ്, ഹീറ്റ്-റെസിസ്റ്റൻ്റ് റിവേഴ്സ് ട്രാൻസ്ക്രിപ്റ്റേസ്), ലയോഫിലൈസ്ഡ് പ്രൊട്ടക്റ്റൻ്റുകൾ, ക്രോമോജെനിക് ഡൈ ഘടകങ്ങൾ എന്നിവ അടങ്ങിയിരിക്കുന്നു.ഉപയോഗിക്കുന്നതിന്, ബഫർ ഉപയോഗിക്കുക, പ്രതികരണ എൻസൈമും പ്രൈമറും കലർത്തി ടെംപ്ലേറ്റിലേക്ക് ചേർക്കുന്നു;ലയോഫിലൈസ്ഡ് പ്രൊട്ടക്റ്റൻ്റ് ചേർക്കുന്നത് നേരെയാകാം.ഇത് ഒരു ലയോഫിലൈസറുമായി ബന്ധിപ്പിച്ച് ലയോഫിലൈസ് ചെയ്തു, ഉപയോഗിക്കുമ്പോൾ പ്രൈമറുകളും ടെംപ്ലേറ്റുകളും മാത്രം ചേർത്തു.ഈ കിറ്റ് ആംപ്ലിഫിക്കേഷൻ്റെ വേഗതയേറിയതും വ്യക്തവുമായ വിഷ്വൽ ഡിറ്റക്ഷൻ നൽകുന്നു, ഏത് നെഗറ്റീവ് പ്രതികരണത്തെ ചുവപ്പിലും പോസിറ്റീവ് പ്രതികരണത്തെ മഞ്ഞയിലേക്കുള്ള മാറ്റത്തിലൂടെയും സൂചിപ്പിക്കുന്നു.
ഘടകം
| ഘടകം | HCB5204A-01 | HCB5204A-02 | HCB5204A-03 |
| ലൂപ്പ്-മെഡിയേറ്റഡ് ആംപ്ലിഫിക്കേഷൻ ബഫർ (ഡൈയോടൊപ്പം) | 0.96 മി.ലി | 4.80 മില്ലി×2 | 9.60 മില്ലി×10 |
| ആർടി-എൻസൈമുകൾ മിക്സ് | 270 μL | 2.70 മി.ലി | 2.70 മില്ലി×10 |
| ലയോഫിലൈസ്ഡ് പ്രൊട്ടക്റ്റൻ്റ് | 0.96 മില്ലി×2 | 9.60 മില്ലി×2 | 9.60 മില്ലി×20 |
അപേക്ഷകൾ
ഡിഎൻഎ അല്ലെങ്കിൽ ആർഎൻഎ ഐസോതെർമൽ ആംപ്ലിഫിക്കേഷനായി.
സംഭരണ വ്യവസ്ഥകൾ
-25~ -15℃-ൽ സംഭരിച്ചിരിക്കുന്ന ഡ്രൈ ഐസ് ഉപയോഗിച്ച് കൊണ്ടുപോകുന്നു.ഇടയ്ക്കിടെ ഫ്രീസ്-ഥോ ഒഴിവാക്കുക, ഉൽപ്പന്നം 12 മാസത്തേക്ക് സാധുതയുള്ളതാണ്.
പ്രോട്ടോക്കോൾ
1.ഊഷ്മാവിൽ ഉപയോഗിക്കേണ്ട പ്രതികരണ ബഫർ ഉരുകുക.നന്നായി മിക്സ് ചെയ്യുന്നതിന് ട്യൂബുകൾ ചുരുക്കത്തിൽ ചുഴലിക്കാറ്റ് അല്ലെങ്കിൽ പലതവണ വിപരീതമാക്കുക, തുടർന്ന് ട്യൂബിൻ്റെ അടിയിലേക്ക് ദ്രാവകം ശേഖരിക്കാൻ സെൻട്രിഫ്യൂജ് ചെയ്യുക.
2.പ്രതികരണ സംവിധാനം തയ്യാറാക്കൽ.ലിക്വിഡ് റിയാക്ഷൻ മിക്സ്, ലയോഫിലൈസ്ഡ് സിസ്റ്റം മിക്സ് എന്നിങ്ങനെ രണ്ട് റിയാക്ഷൻ സിസ്റ്റങ്ങളിൽ ഈ റീജൻ്റ് തയ്യാറാക്കാം.
1) ദ്രാവക പ്രതികരണ മിശ്രിതം തയ്യാറാക്കുക
| ഘടകം | വ്യാപ്തം |
| ലൂപ്പ്-മെഡിയേറ്റഡ് ആംപ്ലിഫിക്കേഷൻ ബഫർ (ഡൈയോടൊപ്പം) | 10 μL |
| ആർടി-എൻസൈമുകൾ മിക്സ് | 2.8 μL |
| 10 × പ്രൈമർ മിക്സ്a | 5 μL |
| ടെംപ്ലേറ്റുകൾ DNA/ RNA b | × μL |
| ന്യൂക്ലീസ് രഹിത വെള്ളം | 50 μL വരെ |
2) ലയോഫിലൈസേഷൻ സിസ്റ്റം മിക്സ്
① ലയോഫിലൈസ്ഡ് മിശ്രിതം തയ്യാറാക്കുക
| ഘടകം | വ്യാപ്തം |
| ലൂപ്പ്-മെഡിയേറ്റഡ് ആംപ്ലിഫിക്കേഷൻ ബഫർ (ഡൈയോടൊപ്പം) | 10 μL |
| ലയോഫിലൈസ്ഡ് പ്രൊട്ടക്റ്റൻ്റ് | 20 μL |
| ആർടി-എൻസൈമുകൾ മിക്സ് | 2.8 μL |
| ന്യൂക്ലീസ് രഹിത വെള്ളം | 50 μL വരെ |
② ലയോഫിലൈസേഷൻ: തയ്യാറാക്കിയ മിശ്രിതം 50μL സിസ്റ്റത്തിൽ ലയോഫിലൈസ് ചെയ്തു
③ പ്രതികരണ മിശ്രിതം തയ്യാറാക്കുക
| ഘടകം | വ്യാപ്തം |
| ലിയോഫിലൈസ് ചെയ്ത മിശ്രിതം | 1 കഷ്ണം |
| 10 × പ്രൈമർ മിക്സ്a | 5 μL |
| ടെംപ്ലേറ്റുകൾ DNA/ RNA b | × μL |
| ന്യൂക്ലീസ് രഹിത വെള്ളം | 50 μL വരെ |
കുറിപ്പുകൾ:
1) എ.10×പ്രൈമർ മിക്സ് : 16 μM FIP/BIP, 2 μM F3/B3, 4 μM ലൂപ്പ് F/B;
2) ബി.ന്യൂക്ലിക് ആസിഡ് ടെമ്പലിന് ഡിഇപിസി (ജലത്തിൽ ലയിക്കുന്ന) ശുപാർശ ചെയ്യുന്നു.
1.65 ഡിഗ്രി സെൽഷ്യസിൽ 30-45 മിനിറ്റ് ഇൻകുബേറ്റ് ചെയ്യുക, ഇത് നിറം മാറുന്ന പ്രതികരണ സമയം അനുസരിച്ച് ഉചിതമായി നീട്ടാം.
2.നഗ്നനേത്രങ്ങൾ അനുസരിച്ച്, മഞ്ഞ നിറം പോസിറ്റീവും ചുവപ്പ് നെഗറ്റീവ് ആയിരുന്നു.
കുറിപ്പുകൾ
1.ബഫർ ട്യൂബിൻ്റെ അടിഭാഗത്ത് ഉപ്പ് പ്രത്യക്ഷപ്പെടാം, ചുരുക്കത്തിൽ ചുഴലിക്കാറ്റ് അല്ലെങ്കിൽ ട്യൂബുകൾ പലതവണ വിപരീതമാക്കുക, ഊഷ്മാവിൽ നന്നായി ഇളക്കുക.
2.പ്രൈമറുകളുടെ അവസ്ഥ അനുസരിച്ച് പ്രതികരണ താപനില 62 ഡിഗ്രി സെൽഷ്യസിനും 68 ഡിഗ്രി സെൽഷ്യസിനും ഇടയിൽ ഒപ്റ്റിമൈസ് ചെയ്യാം.
3.പാക്കേജുചെയ്ത റിയാഗൻ്റുകൾ ദീർഘനേരം വായുവിൽ നിൽക്കരുത്.
4.ചുവപ്പും മഞ്ഞയും നിറവ്യത്യാസ പ്രതികരണം പ്രതികരണ സംവിധാനത്തിൻ്റെ pH മാറ്റത്തെ ആശ്രയിച്ചിരിക്കുന്നു, ദയവായി ddH ഉപയോഗിക്കാൻ ശുപാർശ ചെയ്യുന്ന Tris ന്യൂക്ലിക് ആസിഡ് സ്റ്റോറേജ് സൊല്യൂഷൻ ഉപയോഗിക്കരുത്.2O സംഭരിച്ച ന്യൂക്ലിക് ആസിഡ്;
5.പ്രതികരണ സംവിധാനം, ലയോഫിലൈസേഷൻ, സാമ്പിൾ പ്രോസസ്സിംഗ്, സാമ്പിൾ ചേർക്കൽ പ്രക്രിയ എന്നിവയുടെ തയ്യാറെടുപ്പ് ഉൾപ്പെടെയുള്ള പരീക്ഷണം സ്റ്റാൻഡേർഡ് ആയിരിക്കണം;
6.മലിനീകരണം ഒഴിവാക്കാൻ, ഒരു അൾട്രാ-ക്ലീൻ ബെഞ്ചിൽ പ്രതികരണ സംവിധാനം തയ്യാറാക്കാൻ ശുപാർശ ചെയ്യുന്നു, മറ്റ് തെറ്റായ പോസിറ്റീവ് ഇടപെടൽ ഒഴിവാക്കാൻ മുറിയുടെ ഫ്യൂം ഹുഡിലേക്ക് ടെംപ്ലേറ്റുകൾ ചേർക്കുക.
