മൾട്ടിപ്ലക്സ് വൺ സ്റ്റെപ്പ് RT-qPCR പ്രിമിക്സ്
വിവരണം
പൂച്ച നമ്പർ: HCR5141A
മൾട്ടിപ്ലെക്‌സ് വൺ സ്റ്റെപ്പ് RT-qPCR പ്രിമിക്സ് എന്നത് ടെംപ്ലേറ്റായി RNA അടിസ്ഥാനമാക്കിയുള്ള ഒരു മൾട്ടിപ്ലക്സ് ക്വാണ്ടിറ്റേറ്റീവ് PCR കിറ്റാണ്.പരീക്ഷണത്തിൽ, റിവേഴ്സ് ട്രാൻസ്ക്രിപ്ഷനും ക്വാണ്ടിറ്റേറ്റീവ് പിസിആറും ഒരേ പ്രതികരണ ട്യൂബിൽ നടത്തപ്പെടുന്നു, ഇത് പരീക്ഷണാത്മക പ്രവർത്തനം ലളിതമാക്കുകയും മലിനീകരണ സാധ്യത കുറയ്ക്കുകയും ചെയ്യുന്നു.ബഫറിൻ്റെയും എൻസൈം മിശ്രിതത്തിൻ്റെയും തനതായ രൂപകൽപ്പന ഒറ്റ-ഘട്ട ലയോഫിലൈസ്ഡ് സിസ്റ്റത്തിൽ ഉപയോഗിക്കാം.ക്വാണ്ടിറ്റേറ്റീവ് ആംപ്ലിഫിക്കേഷനായി ഹോട്ട്സ്റ്റാർട്ട് ടാക്ക് ഡിഎൻഎ പോളിമറേസ് ഉപയോഗിച്ച് ആദ്യ സ്ട്രാൻഡ് സിഡിഎൻഎയുടെ കാര്യക്ഷമമായ സമന്വയത്തിനായി കിറ്റ് ചൂട്-പ്രതിരോധശേഷിയുള്ള റിവേഴ്സ് ട്രാൻസ്ക്രിപ്റ്റേസ് ഉപയോഗിക്കുന്നു.ഇതിൽ ഒപ്റ്റിമൈസ് ചെയ്ത റിയാക്ഷൻ ബഫർ, എൻസൈമുകളുടെ മിശ്രിതം മുതലായവ അടങ്ങിയിരിക്കുന്നു, കൂടാതെ നോൺ-സ്പെസിഫിക് പിസിആർ ആംപ്ലിഫിക്കേഷനെ ഫലപ്രദമായി തടയുകയും ഒന്നിലധികം qPCR പ്രതിപ്രവർത്തനങ്ങളുടെ ആംപ്ലിഫിക്കേഷൻ കാര്യക്ഷമത വർദ്ധിപ്പിക്കുകയും ചെയ്യുന്ന ഘടകങ്ങളും ചേർത്തു, പ്രൈമറുകളുടെ ആംപ്ലിഫിക്കേഷൻ കാര്യക്ഷമത ഉറപ്പാക്കുമ്പോൾ ഒന്നിലധികം ഫ്ലൂറസെൻസ് ക്വാണ്ടിറ്റേറ്റീവ് ആംപ്ലിഫിക്കേഷൻ സാധ്യമാക്കുന്നു.
ഘടകങ്ങൾ
| പേര് |
| 1. ലിയോ-ബഫർ |
| 2. ലിയോ-എൻസൈം മിക്സ് |
| 3. ലിയോ പ്രൊട്ടക്റ്റൻ്റ് |
ഗതാഗത വ്യവസ്ഥഅയോൺ
A: ലിയോ-ബഫറും സംരക്ഷണവും: -25~-15℃, ഷെൽഫ് ആയുസ്സ് 1 വർഷമാണ്.
ബി: ലിയോ-എൻസൈം മിശ്രിതം, 2-8 ℃, ഷെൽഫ് ആയുസ്സ് 6 മാസമാണ്.
പ്രവർത്തനത്തിനുള്ള നിർദ്ദേശം
1. പ്രതികരണ സംവിധാനം (ഉദാഹരണമായി 25μL എടുക്കുക)
| ഘടകങ്ങൾ | വോളിയം (μL) | അന്തിമ ഏകാഗ്രത |
| ലിയോ-ബഫർ | 6 | 1* |
| ലിയോ-എൻസൈം മിക്സ് | 1 | - |
| ലിയോ-പ്രൊട്ടക്ടൻ്റ് | 8 | - |
| പ്രൈമർ മിക്സ് (10μM) | 1 | 0.1- 1uM |
| പ്രോബ് മിക്സ് (10μM) | 0.5 | 0.05-0.5uM |
| RNA ടെംപ്ലേറ്റ് | 5 | - |
| DEPC H2O | 25 വരെ | - |
2. ഒപ്റ്റിമൈസ് ചെയ്ത സൈക്ലിംഗ് പ്രോട്ടോക്കോൾ
1) സ്റ്റാൻഡേർഡ് സൈക്ലിംഗ് പ്രോട്ടോക്കോൾ
| പ്രതികരണ ഘട്ടം | താപനില | സമയം | സൈക്കിൾ | |
| 1 | റിവേഴ്സ് ട്രാൻസ്ക്രിപ്ഷൻ | 50°Ca | 10മിനിറ്റ് | 1 |
| 2 | പ്രാരംഭ ഡീനാറ്ററേഷൻ | 95°C | 5മിനിറ്റ് | 1 |
| 3 | ആംപ്ലിഫിക്കേഷൻ പ്രതികരണം | 95°C | 15 സെക്കൻഡ് | 45 സൈക്കിളുകൾ |
| 60 ഡിഗ്രി സെൽഷ്യസ്b | 30 സെക്കൻഡ്c |
2) ഫാസ്റ്റ് സൈക്ലിംഗ് പ്രോട്ടോക്കോൾ
|
| പ്രതികരണ ഘട്ടം | താപനില | സമയം | സൈക്കിൾ |
| 1 | റിവേഴ്സ് ട്രാൻസ്ക്രിപ്ഷൻ | 50°Ca | 2മിനിറ്റ് | 1 |
| 2 | പ്രാരംഭ ഡീനാറ്ററേഷൻ | 95°C | 2സെക്കൻഡ് | 1 |
| 3 | ആംപ്ലിഫിക്കേഷൻ പ്രതികരണം | 95°C | 1 സെക്കൻഡ് |
45 സൈക്കിളുകൾ |
| 60 ഡിഗ്രി സെൽഷ്യസ്b | 13 സെക്കൻഡ്c |
കുറിപ്പ്:
a) വിപരീതം ട്രാൻസ്ക്രിപ്ഷൻ: താപനില 10-15 മിനിറ്റ് നേരത്തേക്ക് 42°C അല്ലെങ്കിൽ 50°C തിരഞ്ഞെടുക്കാം.
b) ആംപ്ലിഫിക്കേഷൻ പ്രതികരണം: രൂപകൽപ്പന ചെയ്ത പ്രൈമറുകളുടെ Tm മൂല്യം അനുസരിച്ച് താപനില ക്രമീകരിച്ചിരിക്കുന്നു.
സി)ഫ്ലൂറസെൻസ് സിഗ്നൽ കൈവശപ്പെടുത്തൽ: ആവശ്യാനുസരണം പരീക്ഷണ നടപടിക്രമം സജ്ജമാക്കുകഉപകരണ മാനുവൽ.
സാങ്കേതിക വിവരങ്ങൾ/സ്പെസിഫിക്കേഷനുകൾ
| ചൂടുള്ള തുടക്കം | ബിൽറ്റ്-ഇൻ ഹോട്ട് സ്റ്റാർട്ട് |
| കണ്ടെത്തൽ രീതി | പ്രൈമർ-പ്രോബ് കണ്ടെത്തൽ |
| PCR രീതി | ഒരു ഘട്ടം RT-qPCR |
| സാമ്പിൾ തരം | ആർ.എൻ.എ |
കുറിപ്പുകൾ
1. ഈ ഉൽപ്പന്നം ഗവേഷണ ഉപയോഗത്തിന് മാത്രമുള്ളതാണ്.
2. നിങ്ങളുടെ ആരോഗ്യവും സുരക്ഷയും ഉറപ്പാക്കാൻ ആവശ്യമായ പിപിഇ, ലാബ് കോട്ട്, കയ്യുറകൾ എന്നിവ ധരിക്കുക!
