DNase I (Rnase ഫ്രീ)(5u/ul)
പൂച്ച നമ്പർ: HC4007A
DNase I (Deoxyribonuclease I) ഒരു എൻഡോഡിയോക്‌സിറൈബോ ന്യൂക്ലീസാണ്, അത് ഒറ്റ-അല്ലെങ്കിൽ ഇരട്ട-സ്ട്രാൻഡഡ് ഡിഎൻഎയെ ദഹിപ്പിക്കാൻ കഴിയും.5'-ടെർമിനലിൽ ഫോസ്ഫേറ്റ് ഗ്രൂപ്പുകളും 3'-ടെർമിനലിൽ ഹൈഡ്രോക്‌സൈലും ഉള്ള മോണോഡിയോക്‌സിന്യൂക്ലിയോടൈഡുകൾ അല്ലെങ്കിൽ സിംഗിൾ അല്ലെങ്കിൽ ഡബിൾ സ്ട്രാൻഡഡ് ഒളിഗോഡോക്‌സിന്യൂക്ലിയോടൈഡുകൾ ഉത്പാദിപ്പിക്കാൻ ഇത് ഫോസ്‌ഫോഡിസ്റ്റർ ബോണ്ടുകളെ തിരിച്ചറിയുകയും പിളർക്കുകയും ചെയ്യുന്നു.DNase I ൻ്റെ പ്രവർത്തനം Ca യെ ആശ്രയിച്ചിരിക്കുന്നു2+കൂടാതെ Mn പോലെയുള്ള ഡൈവാലൻ്റ് ലോഹ അയോണുകൾ വഴി സജീവമാക്കാം2+കൂടാതെ Zn2+.5 mM Ca2+ഹൈഡ്രോളിസിസിൽ നിന്ന് എൻസൈമിനെ സംരക്ഷിക്കുന്നു.എംജിയുടെ സാന്നിധ്യത്തിൽ2+, എൻസൈമിന് ഡിഎൻഎയുടെ ഏത് ഇഴയിലുമുള്ള ഏത് സൈറ്റിനെയും ക്രമരഹിതമായി തിരിച്ചറിയാനും പിളർത്താനും കഴിയും.എം.ൻ്റെ സാന്നിധ്യത്തിൽ2+, ഡിഎൻഎയുടെ ഇരട്ട സരണികൾ ഒരേസമയത്ത് തിരിച്ചറിയുകയും ഏതാണ്ട് അതേ സ്ഥലത്ത് പിളർന്ന് 1-2 ന്യൂക്ലിയോടൈഡുകൾ നീണ്ടുനിൽക്കുന്ന പരന്ന എൻഡ് ഡിഎൻഎ ശകലങ്ങളോ ഒട്ടിപ്പിടിക്കുന്ന അവസാനത്തെ ഡിഎൻഎ ശകലങ്ങളോ രൂപപ്പെടുത്തുകയും ചെയ്യാം.
ഘടകങ്ങൾ
| പേര് | 0.1KU | 1KU | 5 കെ.യു | 50 കെ.യു |
| DNase I, RNase-free | 20μL | 200μL | 1mL | 10 മി.ലി |
| 10×DNase I ബഫർ | 1mL | 1mL | 5 × 1mL | 5 × 10 മില്ലി |
സംഭരണ വ്യവസ്ഥകൾ
സംഭരണത്തിനായി -25℃~-15℃;ഐസ് പായ്ക്കുകൾക്ക് കീഴിൽ ഗതാഗതം.
നിർദ്ദേശങ്ങൾ
1. താഴെ ലിസ്റ്റുചെയ്തിരിക്കുന്ന അനുപാതങ്ങൾ അനുസരിച്ച് RNase-ഫ്രീ ട്യൂബിൽ പ്രതികരണ പരിഹാരം തയ്യാറാക്കുക:
| ഘടകം | വ്യാപ്തം |
| ആർ.എൻ.എ | X µg |
| 10 × DNase I ബഫർ | 1μL |
| DNase I, RNase-free(5U/μL) | ഒരു µg RNA① 1 U |
| ddH2O | 10μL വരെ |
കുറിപ്പ്: ①ആർഎൻഎയുടെ അളവ് അടിസ്ഥാനമാക്കി ചേർക്കേണ്ട DNase I യുടെ അളവ് കണക്കാക്കുക.
2. 15 മിനിറ്റിന് 37 ℃;
3. 2.5mM~5mM എന്ന അന്തിമ സാന്ദ്രതയിലേക്ക് 0.5M EDTA ചേർക്കുക, പ്രതികരണം നിർത്താൻ 65℃ 10 മിനിറ്റ് ചൂടാക്കുക.റിവേഴ്സ് ട്രാൻസ്ക്രിപ്ഷൻ പോലുള്ള അടുത്ത പ്രതികരണത്തിനായി സാമ്പിൾ നേരിട്ട് ഉപയോഗിക്കാംപരീക്ഷണം.
യൂണിറ്റ് നിർവ്വചനം
ഒരു യൂണിറ്റ് 1µg pBR322 ൻ്റെ പൂർണ്ണമായി നശിപ്പിക്കുന്ന എൻസൈമിൻ്റെ അളവാണ്.37 ഡിഗ്രിയിൽ 10 മിനിറ്റിനുള്ളിൽ ഡിഎൻഎ.
ഗുണനിലവാര നിയന്ത്രണം
RNase:37 ഡിഗ്രിയിൽ 4 മണിക്കൂർ 1.6µg MS2 RNA ഉള്ള DNase I യുടെ 5U ഡീഗ്രേഡേഷൻ നൽകുന്നില്ല.അഗറോസ് ജെൽ ഇലക്ട്രോഫോറെസിസ് നിർണ്ണയിക്കുന്നത്.
കുറിപ്പുകൾ
1. ദയവായി 0.5MEDTA സ്വയം തയ്യാറാക്കുക.
2. ഓരോ µg RNA യിലും 1U DNase I ഉപയോഗിക്കുക.എന്നിരുന്നാലും, RNA 1µg-ൽ കുറവാണെങ്കിൽ, ദയവായി 1U DNase I ഉപയോഗിക്കുക.
3. പ്രവർത്തന സമയത്ത് എൻസൈം ഐസിൽ വയ്ക്കുക.
