CHO HCP ELISA കിറ്റ്

ഈ പരിശോധനയിൽ ഒരു-ഘട്ട ഇമ്മ്യൂണോസോർബൻ്റ് ELISA രീതി ഉപയോഗിക്കുന്നു.CHOK1 HCP അടങ്ങിയ സാമ്പിളുകൾ ഒരേസമയം HRP-ലേബൽ ചെയ്‌ത ആട് ആൻ്റി-CHOK1 ആൻ്റിബോഡിയുമായും ELISA പ്ലേറ്റിൽ പൊതിഞ്ഞ ആൻ്റി-CHOK1 ആൻ്റിബോഡിയുമായും പ്രതിപ്രവർത്തിക്കുന്നു, ഒടുവിൽ സോളിഡ്-ഫേസ് ആൻ്റിബോഡി-HCP-ലേബൽ ചെയ്ത ആൻ്റിബോഡിയുടെ ഒരു സാൻഡ്‌വിച്ച് കോംപ്ലക്‌സ് രൂപപ്പെടുന്നു.ELISA പ്ലേറ്റ് കഴുകുന്നതിലൂടെ അൺബൗണ്ട് ആൻ്റിജൻ-ആൻ്റിബോഡി നീക്കംചെയ്യാം.മതിയായ പ്രതികരണത്തിനായി TMB അടിവസ്ത്രം കിണറ്റിൽ ചേർക്കുന്നു.സ്റ്റോപ്പ് സൊല്യൂഷൻ ചേർത്തതിന് ശേഷം വർണ്ണ വികസനം നിർത്തുന്നു, കൂടാതെ 450/650nm-ൽ പ്രതികരണ പരിഹാരത്തിൻ്റെ OD അല്ലെങ്കിൽ ആഗിരണം മൂല്യം ഒരു മൈക്രോപ്ലേറ്റ് റീഡർ ഉപയോഗിച്ച് വായിക്കുന്നു.OD മൂല്യം അല്ലെങ്കിൽ ആഗിരണം മൂല്യം ലായനിയിലെ HCP ഉള്ളടക്കത്തിന് ആനുപാതികമാണ്.ഇതിൽ നിന്ന്, ലായനിയിലെ എച്ച്സിപി സാന്ദ്രത സ്റ്റാൻഡേർഡ് കർവ് അനുസരിച്ച് കണക്കാക്കാം.

അപേക്ഷ

സാമ്പിളുകളിലെ CHOK1 ഹോസ്റ്റ് സെൽ പ്രോട്ടീൻ അവശിഷ്ടങ്ങളുടെ ഉള്ളടക്കം അളവ് കണ്ടുപിടിക്കാൻ ഈ കിറ്റ് ഉപയോഗിക്കുന്നു.

Cഎതിരാളികൾ

ആവശ്യമായ ഉപകരണങ്ങൾ

സംഭരണവും സ്ഥിരതയും

1.ഗതാഗതം -25~-15°C.

2.സംഭരണ ​​വ്യവസ്ഥകൾ പട്ടിക 1 ൽ കാണിച്ചിരിക്കുന്നത് പോലെയാണ്;1-2 ഘടകങ്ങൾ ≤-20°C, 5-6 സംഭരിച്ചിരിക്കുന്നു RT,3、4,7,8 2-8 ഡിഗ്രിയിൽ സൂക്ഷിക്കുന്നു;കാലാവധി 12 മാസമാണ്.

ഉൽപ്പന്ന പാരാമീറ്ററുകൾ

1.സംവേദനക്ഷമത: 1ng/mL

2.കണ്ടെത്തൽ പരിധി:3- 100ng/mL

3.കൃത്യത: ഇൻട്രാ-അസ്സേ CV≤ 10%, ഇൻ്റർ-അസ്സേ CV≤ 15%

4.HCP കവറേജ്: >80%

5.പ്രത്യേകത: ശുദ്ധീകരണ പ്രക്രിയയിൽ നിന്ന് സ്വതന്ത്രമായി CHOK1 HCP-യുമായി പ്രത്യേകമായി പ്രതികരിക്കുന്നതിനാൽ ഈ കിറ്റ് സാർവത്രികമാണ്.

റീജൻ്റ് തയ്യാറാക്കൽ

1.PBST 0.05%

ddH-ൽ ലയിപ്പിച്ച 20×PBST 0.05% 15 മില്ലി എടുക്കുക₂O, 300 മില്ലി വരെ ഉണ്ടാക്കി.

2.1.0% ബിഎസ്എ

കുപ്പിയിൽ നിന്ന് 1 ഗ്രാം ബിഎസ്എ എടുത്ത് 100 മില്ലി പിബിഎസ്ടി 0.05% നേർപ്പിക്കുക, പൂർണ്ണമായും അലിഞ്ഞുപോകുന്നതുവരെ നന്നായി ഇളക്കുക, 2-8 ഡിഗ്രി സെൽഷ്യസിൽ സൂക്ഷിക്കുക.തയ്യാറാക്കിയ ഡില്യൂഷൻ ബഫർ 7 ദിവസത്തേക്ക് സാധുതയുള്ളതാണ്.ആവശ്യാനുസരണം തയ്യാറാക്കാൻ ശുപാർശ ചെയ്യുന്നു.

3.കണ്ടെത്തൽ പരിഹാരം 2μg/mL

2μg/mL കണ്ടെത്തൽ ലായനിയുടെ അന്തിമ സാന്ദ്രത ലഭിക്കുന്നതിന് 0.5 mg/mL ആൻ്റി-CHO HCP-HRP-ൻ്റെ 48μL എടുത്ത് 1% BSA-യുടെ 11,952μL നേർപ്പിക്കുക.

4.ക്യുസിയും CHOK1 HCP മാനദണ്ഡങ്ങളും തയ്യാറാക്കൽ

പട്ടിക: ക്യുസിയും മാനദണ്ഡങ്ങളും തയ്യാറാക്കൽ 

പരിശോധനാ നടപടിക്രമം

1.മുകളിലെ "റിയാജൻ്റ് തയ്യാറാക്കൽ" എന്നതിൽ സൂചിപ്പിച്ചിരിക്കുന്നതുപോലെ റിയാഗൻ്റുകൾ തയ്യാറാക്കുക.

2.ഓരോ കിണറിലേക്കും 50μL മാനദണ്ഡങ്ങളും സാമ്പിളുകളും ക്യുസികളും (പട്ടിക 3 കാണുക) എടുക്കുക, തുടർന്ന് 100μL ഡിറ്റക്ഷൻ സൊല്യൂഷൻ (2μg/mL) ചേർക്കുക;സീലർ ഉപയോഗിച്ച് പ്ലേറ്റ് മൂടുക, തെർമോമിക്സറിൽ ELISA പ്ലേറ്റ് സ്ഥാപിക്കുക.500rpm, 25±3℃ 2 മണിക്കൂർ ഇൻകുബേറ്റ് ചെയ്യുക.

3.സിങ്കിലെ മൈക്രോപ്ലേറ്റ് വിപരീതമാക്കുകയും കോട്ടിംഗ് ലായനി ഉപേക്ഷിക്കുകയും ചെയ്യുക.ELISA പ്ലേറ്റ് കഴുകി ലായനി കളയാൻ ഓരോ കിണറിലേക്കും PBST 0.05% പൈപ്പ് 300μL, കഴുകൽ 3 തവണ ആവർത്തിക്കുക.വൃത്തിയുള്ള പേപ്പർ ടവലിൽ പ്ലേറ്റ് മറിച്ചിട്ട് ഉണക്കുക.

4.ഓരോ കിണറിലേക്കും 100μL ofTMB സബ്‌സ്‌ട്രേറ്റ് ചേർക്കുക (പട്ടിക 1 കാണുക), ELISA പ്ലേറ്റ് അടച്ച് 25±3℃ 15 മിനിറ്റ് ഇരുട്ടിൽ ഇൻകുബേറ്റ് ചെയ്യുക.

5.ഓരോ കിണറിലേക്കും 100μL സ്റ്റോപ്പ് ലായനി പൈപ്പ് ചെയ്യുക.

6.മൈക്രോപ്ലേറ്റ് റീഡർ ഉപയോഗിച്ച് 450/650nm തരംഗദൈർഘ്യത്തിൽ ആഗിരണം അളക്കുക.

7.SoftMax അല്ലെങ്കിൽ തത്തുല്യമായ സോഫ്റ്റ്‌വെയർ ഉപയോഗിച്ച് ഡാറ്റ വിശകലനം ചെയ്യുക.നാല് പാരാമീറ്റർ ലോജിസ്റ്റിക് റിഗ്രഷൻ മോഡൽ ഉപയോഗിച്ച് സ്റ്റാൻഡേർഡ് കർവ് പ്ലോട്ട് ചെയ്യുക.

സ്റ്റാൻഡേർഡ് കർവ് ഉദാഹരണം

ശ്രദ്ധിക്കുക: സാമ്പിളിലെ HCP യുടെ സാന്ദ്രത സ്റ്റാൻഡേർഡ് കർവിൻ്റെ മുകളിലെ പരിധി കവിയുന്നുവെങ്കിൽ, പരിശോധനയ്ക്ക് മുമ്പ് അത് ഡില്യൂഷൻ ബഫർ ഉപയോഗിച്ച് ശരിയായി നേർപ്പിക്കേണ്ടതുണ്ട്.

കുറിപ്പുകൾ

സ്റ്റോപ്പ് സൊല്യൂഷൻ 2M സൾഫ്യൂറിക് ആസിഡാണ്, തെറിക്കുന്നത് ഒഴിവാക്കാൻ ശ്രദ്ധയോടെ കൈകാര്യം ചെയ്യുക!