5×നിയോസ്ക്രിപ്റ്റ് ഫാസ്റ്റ് RT-qPCR പ്രിമിക്സ് പ്ലസ്-UNG

പൂച്ച നമ്പർ: HCB5142A

നിയോസ്‌ക്രിപ്റ്റ് ഫാസ്റ്റ് RT Premix-UNG (Probe qRT-PCR) വൺ-സ്റ്റെപ്പ് റിവേഴ്‌സ് ട്രാൻസ്‌ക്രിപ്ഷനും ക്വാണ്ടിറ്റേറ്റീവ് PCR (qRT-PCR) നും അനുയോജ്യമായ ഒരു ട്യൂബ് പ്രോബ് അധിഷ്ഠിത മിശ്രിതമാണ്.ഇത് പ്രൈമറുകളുടെയും പ്രോബുകളുടെയും പ്രീ-മിക്സിംഗ് പിന്തുണയ്ക്കുന്നു, കുറഞ്ഞ താപനിലയിൽ ദീർഘകാല സംഭരണത്തിന് ശേഷം സ്ഥിരത നിലനിർത്തുന്നു.അധിക ട്യൂബ് ഓപ്പണിംഗ്/പൈപ്പറ്റിംഗ് ഓപ്പറേഷൻ കൂടാതെ ഉപയോഗിക്കുമ്പോൾ പരിശോധിക്കേണ്ട സാമ്പിൾ നേരിട്ട് ചേർക്കാവുന്നതാണ്.ഈ ഉൽപ്പന്നം ഘടകങ്ങൾ നൽകുന്നു, ഉദാ: ഹോട്ട്-സ്റ്റാർട്ട് ഡിഎൻഎ പോളിമറേസ്, എം-എംഎൽവി, ഹീറ്റ്-ലേബിൽ യുറാസിൽ ഡിഎൻഎ ഗ്ലൈക്കോസൈലേസ് (ടിഎസ്-യുഎൻജി), ആർനേസ് ഇൻഹിബിറ്റർ, എംജിസിഎൽ₂, dNTP-കൾ (dTTP-ക്ക് പകരം dUTP-യ്‌ക്കൊപ്പം), സ്റ്റെബിലൈസറുകൾ.ജനിതകമാറ്റം വരുത്തിയ ദ്രുത ആംപ്ലിഫിക്കേഷൻ റിവേഴ്സ് ട്രാൻസ്ക്രിപ്റ്റേസും ഡിഎൻഎ പോളിമറേസും ഉപയോഗിച്ച് 20-40 മിനിറ്റിനുള്ളിൽ പിസിആർ ആംപ്ലിഫിക്കേഷൻ പൂർത്തിയാക്കാൻ സാധിക്കും.ആൻ്റി-ഇൻഹിബിറ്ററി ആംപ്ലിഫിക്കേഷൻ എൻസൈമിൻ്റെയും യുഎൻജി എൻസൈമിൻ്റെയും മിക്സഡ് എൻസൈമുകളുള്ള qPCR-ന് ഈ റിയാജൻ്റ് പ്രത്യേക ബഫർ ഉപയോഗിക്കുന്നു.അതിനാൽ, ഇതിന് ടാർഗെറ്റ് ജീനുകളുടെ നല്ല ആംപ്ലിഫിക്കേഷൻ നേടാനും പിസിആർ അവശിഷ്ടങ്ങളും എയറോസോൾ മലിനീകരണവും മൂലമുണ്ടാകുന്ന തെറ്റായ ആംപ്ലിഫിക്കേഷൻ തടയാനും കഴിയും.അപ്ലൈഡ് ബയോസിസ്റ്റംസ്, എപ്പൻഡോർഫ്, ബയോ-റാഡ്, റോച്ചെ തുടങ്ങിയ നിർമ്മാതാക്കളിൽ നിന്നുള്ള മിക്ക ഫ്ലൂറസെൻസ് ക്വാണ്ടിറ്റേറ്റീവ് പിസിആർ ഉപകരണങ്ങളുമായി ഈ റിയാജൻ്റ് പൊരുത്തപ്പെടുന്നു.

ഘടകം

1.25×നിയോസ്ക്രിപ്റ്റ് ഫാസ്റ്റ് RTase/UNG മിക്സ്

2.5×നിയോസ്ക്രിപ്റ്റ് ഫാസ്റ്റ് ആർടി പ്രിമിക്സ് ബഫർ (dUTP)

സംഭരണ ​​വ്യവസ്ഥകൾ

എല്ലാ ഘടകങ്ങളും ദീർഘകാല സംഭരണത്തിനായി -20 ഡിഗ്രിയിലും 3 മാസം വരെ 4 ഡിഗ്രിയിലും സൂക്ഷിക്കണം.ഉപയോഗിക്കുന്നതിന് മുമ്പ്, ഉരുകിയ ശേഷം നന്നായി മിക്സ് ചെയ്യുക, സെൻട്രിഫ്യൂജ് ചെയ്യുക.ഇടയ്ക്കിടെ ഫ്രീസ്-ഥോവ് ഒഴിവാക്കുക.

qRT-PCR പ്രതികരണ സംവിധാനം തയ്യാറാക്കൽ

1) a. പ്രൈമറിൻ്റെ അന്തിമ സാന്ദ്രത സാധാരണയായി 0.2μM ആണ്.മികച്ച ഫലങ്ങൾക്കായി, പ്രൈമർ കോൺസൺട്രേഷൻ 0.2-1μM പരിധിക്കുള്ളിൽ ഒപ്റ്റിമൈസ് ചെയ്യാം.സാധാരണയായി, പ്രോബ് കോൺസൺട്രേഷൻ 0.1-0.3μM പരിധിക്കുള്ളിൽ ഒപ്റ്റിമൈസ് ചെയ്യാൻ കഴിയും.

2) b. വേഗതയേറിയ PCR നടപടിക്രമം ഉപയോഗിക്കുമ്പോൾ, പ്രൈമറുകളുടെയും പ്രോബുകളുടെയും സാന്ദ്രത വർദ്ധിപ്പിക്കുന്നത് മികച്ച ആംപ്ലിഫിക്കേഷൻ ഫലങ്ങൾക്ക് കാരണമായേക്കാം, അവയുടെ അനുപാതം അതിനനുസരിച്ച് ഒപ്റ്റിമൈസ് ചെയ്യണം.

3) വ്യത്യസ്ത തരം സാമ്പിളുകളിൽ വ്യത്യസ്ത തരങ്ങളും ഇൻഹിബിറ്ററിൻ്റെ ഉള്ളടക്കവും ടാർഗെറ്റ് ജീനിൻ്റെ കോപ്പി നമ്പറും അടങ്ങിയിരിക്കുന്നു.സാമ്പിൾ വോളിയം യഥാർത്ഥ അവസ്ഥ അനുസരിച്ച് പരിഗണിക്കണം.ആവശ്യമെങ്കിൽ ന്യൂക്ലീസ് രഹിത വെള്ളം അല്ലെങ്കിൽ TE ബഫർ ഉപയോഗിച്ച് സാമ്പിൾ നേർപ്പിക്കുക.

പ്രതികരണം സിവ്യവസ്ഥകൾ

ഗുണനിലവാര നിയന്ത്രണം

1.ഫംഗ്‌ഷൻ കണ്ടെത്തൽ: qPCR-ൻ്റെ സംവേദനക്ഷമത, പ്രത്യേകത, ആവർത്തനക്ഷമത.

2.എക്സോജനസ് ന്യൂക്ലീസ് പ്രവർത്തനമില്ല: എക്സോജനസ് എൻഡോ ന്യൂക്ലീസും എക്സോന്യൂക്ലീസും മലിനീകരണമില്ല.

കുറിപ്പുകൾ

1.ദ്രുത DNA പോളിമറേസിൻ്റെ ആംപ്ലിഫിക്കേഷൻ നിരക്ക് 1kb/10s-ൽ കുറവല്ല.വ്യത്യസ്‌ത PCR ഉപകരണങ്ങൾക്ക് വ്യത്യസ്‌ത തപീകരണ, തണുപ്പിക്കൽ വേഗത, താപനില നിയന്ത്രണ മോഡുകൾ, താപ ചാലകത എന്നിവയുണ്ട്, അതിനാൽ നിങ്ങളുടെ പ്രൈമർ/പ്രോബ് കോൺസൺട്രേഷൻ ഒപ്റ്റിമൈസേഷൻ, നിങ്ങളുടെ നിർദ്ദിഷ്ട ഫാസ്റ്റ് PCR ഉപകരണവുമായി സംയോജിപ്പിച്ച് റണ്ണിംഗ് രീതി എന്നിവ അത്യന്താപേക്ഷിതമാണ്.

2.ഈ ഉൽപ്പന്നം വിശാലമായ പ്രയോഗക്ഷമത നിർവഹിക്കുന്നു, ഉയർന്ന സെൻസിറ്റിവിറ്റി തന്മാത്രാ രോഗനിർണയത്തിന് ഇത് അനുയോജ്യമാണ്.കുറഞ്ഞ അനീലിംഗ് താപനിലയുള്ള പ്രൈമറുകൾക്കോ ​​200 ബിപിയിൽ കൂടുതലുള്ള നീളമുള്ള ശകലങ്ങൾ വർദ്ധിപ്പിക്കുന്നതിനോ ത്രീ-സ്റ്റെപ്പ് പിസിആർ രീതി ശുപാർശ ചെയ്യുന്നു.

3.വ്യത്യസ്‌ത ആംപ്ലിക്കോണുകൾക്ക് dUTP-യുടെ വ്യത്യസ്‌ത ഉപയോഗക്ഷമതയും യുഎൻജിയോടുള്ള വ്യത്യസ്ത സംവേദനക്ഷമതയും ഉള്ളതിനാൽ, യുഎൻജി സിസ്റ്റം ഉപയോഗിക്കുമ്പോൾ കണ്ടെത്തൽ സംവേദനക്ഷമത കുറയുകയാണെങ്കിൽ റിയാഗൻ്റുകൾ ഒപ്റ്റിമൈസ് ചെയ്യണം.ആവശ്യമെങ്കിൽ സാങ്കേതിക പിന്തുണയ്‌ക്കായി ഞങ്ങളെ ബന്ധപ്പെടുക.

4.ക്യാരിഓവർ പിസിആർ ഉൽപ്പന്നങ്ങളുടെ ആംപ്ലിഫിക്കേഷൻ ഒഴിവാക്കുന്നതിന്, ആംപ്ലിഫിക്കേഷനായി സമർപ്പിത പരീക്ഷണ ഏരിയയും പൈപ്പറ്റും ആവശ്യമാണ്.കയ്യുറകൾ ഉപയോഗിച്ച് പ്രവർത്തിക്കുകയും ഇടയ്ക്കിടെ മാറ്റുകയും ചെയ്യുക, ആംപ്ലിഫിക്കേഷന് ശേഷം PCR ട്യൂബ് തുറക്കരുത്.