ഡിനേസ് ഐ
DNase I (Deoxyribonuclease I) ഒരു എൻഡോഡിയോക്‌സിറൈബോ ന്യൂക്ലീസാണ്, അത് ഒറ്റ-അല്ലെങ്കിൽ ഇരട്ട-സ്ട്രാൻഡഡ് ഡിഎൻഎയെ ദഹിപ്പിക്കാൻ കഴിയും.5′-ടെർമിനലിൽ ഫോസ്ഫേറ്റ് ഗ്രൂപ്പുകളും 3′-ടെർമിനലിൽ ഹൈഡ്രോക്‌സൈലും ഉള്ള മോണോഡിയോക്സിന്യൂക്ലിയോടൈഡുകൾ അല്ലെങ്കിൽ സിംഗിൾ- അല്ലെങ്കിൽ ഡബിൾ-സ്ട്രാൻഡഡ് ഒലിഗോഡോക്സിന്യൂക്ലിയോടൈഡുകൾ ഉൽപ്പാദിപ്പിക്കുന്നതിന് ഇത് ഫോസ്ഫോഡീസ്റ്റർ ബോണ്ടുകളെ തിരിച്ചറിയുകയും പിളർത്തുകയും ചെയ്യുന്നു.DNase I-ൻ്റെ പ്രവർത്തനം Ca2+ നെ ആശ്രയിച്ചിരിക്കുന്നു, കൂടാതെ Mn2+, Zn2+ എന്നിവ പോലുള്ള ഡൈവാലൻ്റ് ലോഹ അയോണുകൾ വഴി ഇത് സജീവമാക്കാം.5mM Ca2+ ജലവിശ്ലേഷണത്തിൽ നിന്ന് എൻസൈമിനെ സംരക്ഷിക്കുന്നു.Mg2+ ൻ്റെ സാന്നിധ്യത്തിൽ, എൻസൈമിന് ഡിഎൻഎയുടെ ഏത് ഇഴയിലുമുള്ള ഏത് സൈറ്റിനെയും ക്രമരഹിതമായി തിരിച്ചറിയാനും പിളർത്താനും കഴിയും.Mn2+ ൻ്റെ സാന്നിധ്യത്തിൽ, ഡിഎൻഎയുടെ ഇരട്ട സരണികൾ ഒരേസമയത്ത് തിരിച്ചറിയുകയും ഏതാണ്ട് ഒരേ സ്ഥലത്ത് പിളർന്ന് 1-2 ന്യൂക്ലിയോടൈഡുകൾ നീണ്ടുനിൽക്കുന്ന പരന്ന എൻഡ് ഡിഎൻഎ ശകലങ്ങളോ ഒട്ടിപ്പിടിക്കുന്ന അവസാനത്തെ ഡിഎൻഎ ശകലങ്ങളോ രൂപപ്പെടുത്തുകയും ചെയ്യാം.
ഉൽപ്പന്ന സ്വത്ത്
Bovine Pancreas DNase I യീസ്റ്റ് എക്സ്പ്രഷൻ സിസ്റ്റത്തിൽ പ്രകടിപ്പിക്കുകയും ശുദ്ധീകരിക്കുകയും ചെയ്തു.
Cഎതിരാളികൾ
| ഘടകം | വ്യാപ്തം | |||
| 0.1KU | 1KU | 5KU | 50KU | |
| DNase I, RNase-free | 20μL | 200μL | 1mL | 10 മില്ലി |
| 10×DNase I ബഫർ | 1mL | 1mL | 5× 1mL | 5× 10mL |
ഗതാഗതവും സംഭരണവും
1. സംഭരണ സ്ഥിരത: – സംഭരണത്തിനായി 15℃~-25℃;
2.ഗതാഗത സ്ഥിരത: ഐസ് പായ്ക്കുകൾക്ക് കീഴിലുള്ള ഗതാഗതം;
3. വിതരണം ചെയ്തത്: 10 mM Tris-HCl, 2 mM CaCl2, 50% ഗ്ലിസറോൾ, 25℃-ൽ pH 7.6.
യൂണിറ്റ് നിർവ്വചനം
37 ഡിഗ്രി സെൽഷ്യസിൽ 10 മിനിറ്റിനുള്ളിൽ 1 µg pBR322 ഡിഎൻഎയെ പൂർണ്ണമായും നശിപ്പിക്കുന്ന എൻസൈമിൻ്റെ അളവാണ് ഒരു യൂണിറ്റിനെ നിർവചിച്ചിരിക്കുന്നത്.
ഗുണനിലവാര നിയന്ത്രണം
RNase:1.6 μg MS2 RNA ഉള്ള DNase I യുടെ 5U 4 മണിക്കൂർ 37 ℃ ന് അഗറോസ് ജെൽ ഇലക്‌ട്രോഫോറെസിസ് നിർണ്ണയിക്കുന്ന തരത്തിൽ ഡീഗ്രേഡേഷൻ നൽകുന്നില്ല.
ബാക്ടീരിയ എൻഡോടോക്സിൻ:LAL-ടെസ്റ്റ്, ചൈനീസ് ഫാർമക്കോപ്പിയ IV 2020 പതിപ്പ് അനുസരിച്ച്, ജെൽ ലിമിറ്റ് ടെസ്റ്റ് രീതി, പൊതു നിയമം (1143).ബാക്ടീരിയൽ എൻഡോടോക്സിൻ ഉള്ളടക്കം ≤10 EU/mg ആയിരിക്കണം.
ഉപയോഗിക്കുന്നതിനുള്ള നിർദ്ദേശങ്ങൾ
1. താഴെ ലിസ്റ്റുചെയ്തിരിക്കുന്ന അനുപാതങ്ങൾക്കനുസരിച്ച് RNase-ഫ്രീ ട്യൂബിൽ പ്രതികരണ പരിഹാരം തയ്യാറാക്കുക:
| ഘടകം | വ്യാപ്തം |
| ആർ.എൻ.എ | X μg |
| 10 × DNase I ബഫർ | 1 μL |
| DNase I, RNase-free(5U/μL) | 1 μg RNA-യ്ക്ക് 1 U |
| ddH2O | 10 μL വരെ |
15 മിനിറ്റിന് 2.37 ℃;
3.പ്രതികരണം നിർത്താൻ ടെർമിനേഷൻ ബഫർ ചേർക്കുക, DNase I നിഷ്ക്രിയമാക്കാൻ 10 മിനിറ്റ് 65℃ ചൂടാക്കുക. അടുത്ത ട്രാൻസ്ക്രിപ്ഷൻ പരീക്ഷണത്തിന് സാമ്പിൾ നേരിട്ട് ഉപയോഗിക്കാം.
കുറിപ്പുകൾ
1. 1 μg RNA യ്ക്ക് 1U DNase I അല്ലെങ്കിൽ 1μg RNA-യിൽ 1U DNase I ഉപയോഗിക്കുക.
2.എൻസൈം നിർജ്ജീവമാക്കുമ്പോൾ RNA നശിക്കപ്പെടുന്നതിൽ നിന്ന് 5 mM ൻ്റെ അന്തിമ സാന്ദ്രതയിലേക്ക് EDTA ചേർക്കണം.
